BRAF D594A 突变定义了结直肠癌中一个独特的生物学和免疫调节亚组，与功能性 CD8+ T 细胞浸润相关

背景：BRAF 非 V600 突变在结直肠癌（CRC）中占相对较小但关键的一部分。然而，关于 BRAF III 类突变在 CRC 中的生物学功能和影响知之甚少。在此，我们旨在探讨 D594A 突变如何影响小鼠 CRC 细胞的生物学行为和免疫相关特征。方法：基于 MC38 细胞建立了 BRAF V600E（I 类）、G469V（II 类）和 D594A（III 类）突变细胞系。通过克隆形成实验、CCK-8 实验、Annexin V/PI 染色和 transwell 实验评估了细胞生长、增殖、凋亡、迁移和侵袭等生物学行为。通过 ELISA 检测可溶性细胞因子的浓度。通过流式细胞术评估免疫调节分子的膜表达和肿瘤浸润淋巴细胞的模式。通过 RNA 测序探索分子机制。免疫组织化学（IHC）染色用于检测肿瘤组织中的 CD8α。通过 qRT-PCR 和 western blot 评估 mRNA 和蛋白质表达。在体内模型中进行了抗 PD-L1 治疗和细胞因子中和实验。结果：D594A 突变细胞表现出比 V600E（I 类）和 G469V（II 类）突变细胞更低级别的恶性特征。同时，D594A 突变导致明显的免疫调节特征，包括 MHC I 类和 PD-L1 的上调。体内实验显示，在 D594A 突变肿瘤中，浸润的 CD8+ T 细胞频率显著增高，这可能为抗 PD-L1 治疗提供潜在反应。RNA 测序分析显示，D594A 突变导致 ATF3 和 THBS1 表达增强，从而在 IFN-γ 处理后促进 CXCL9 和 CXCL10 的产生。此外，中和 CXCL9 或 CXCL10 减少了 CD8+ T 细胞向 THBS1 过表达肿瘤的浸润。结论：D594A 突变 CRC 表现出较低的侵袭性和免疫激活表型。ATF3-THBS1-CXCL9/CXCL10 轴介导功能性 CD8+ T 细胞浸润到 D594A 突变 CRC 的微环境中。我们的研究有助于定义 CRC 中的这种突变，并为设计有效的免疫治疗策略提供重要见解。