一种不对称的四价抗体是促红细胞生成素受体在体外和体内的有效激动剂

促红细胞生成素通过两个不同的位点结合不对称的EPOR二聚体，在造血细胞中启动EPOR信号传导。我们设计了二聚双抗体-Fc融合蛋白，在细胞增殖试验中似乎是人EPOR的有效激动剂。然而，对其寡聚形式的详细分析显示，主要的Db-Fc物种以高亲和力结合EPOR，但未能诱导细胞增殖。相反，一种次要的寡聚形式，被鉴定为假定的四抗体融合两个Fc结构域，被证明是最小的活性形式。四聚体激动剂的存在得到了晶体学的进一步支持，晶体学揭示了一种不对称的Tb结构。此外，与EPOR结合的抗原结合片段的结构揭示了一个不同于EPO结合位点的表位，结构建模表明，Tb上四个结合位点中的两个的参与可以形成一个不对称的EPOR二聚体，几乎与EPO招募的活性构象相同。在敲入小鼠模型中，小鼠EPOR被替换为人EPOR，纯化的Tb-Fc2刺激红细胞生成的效力、疗效和持续时间均优于darbepoetin，darbepoetin是领先的治疗性红细胞生成刺激剂的重组EPO。总的来说，这些发现表明，不对称的四价抗体如Tb-Fc2代表了有前途的下一代ESA，提供了增强的效力、疗效和耐久性。此外，它们可能降低与EPO多效性相关的致癌和心血管风险。