动物模型与样本采集
获取繁殖季和非繁殖季奶山羊的睾丸、精液和血液样本。
选用20只成年雄性关中奶山羊,分别在4月(非繁殖季)和10月(繁殖季)采集精液、血液和睾丸组织。
Changes in histology, protein expression, and autophagy in dairy goat testes during nonbreeding season†
包含动物模型、组织学、ELISA、Western blot、TUNEL和TEM等实验,但主要为观察性检测,缺乏功能验证和机制验证。
成年雄性关中奶山羊(10-12月龄)
季节(4月非繁殖季 vs 10月繁殖季) 精液采集方式:电刺激法,每周两次,每只山羊3个精液样本 动物数量:精液和血液样本n=10,睾丸组织n=5 ELISA检测血清睾酮和FSH水平 Western blot检测蛋白表达,GAPDH为内参
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
获取繁殖季和非繁殖季奶山羊的睾丸、精液和血液样本。
选用20只成年雄性关中奶山羊,分别在4月(非繁殖季)和10月(繁殖季)采集精液、血液和睾丸组织。
比较繁殖季和非繁殖季奶山羊的精液质量和激素水平变化。
使用光学显微镜评估精子浓度、活力、存活率和异常率;使用ELISA检测血清睾酮和FSH水平。
观察睾丸组织学变化和生殖细胞凋亡情况。
对睾丸组织进行HE染色观察组织学;TUNEL检测凋亡生殖细胞。
检测凋亡、增殖、支持细胞功能和自噬相关蛋白的表达。
Western blot检测BAX、BCL2、Cyt c、CASP3、FSHR、WT1、ABP、GDNF、SCF、PCNA、LC3、p62等蛋白表达。
评估支持细胞自噬活性和超微结构变化。
Western blot检测LC3-II/I比值和p62水平;免疫组化定位LC3和p62;TEM观察支持细胞超微结构和自噬体。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 组织固定 | Bouin固定液 | -- | -- |
| 免疫组化 | 抗LC3抗体 | BIOSS | bs-8878R |
| 抗p62抗体 | Proteintech | 18420-1-AP | |
| 山羊抗兔IgG/HRP偶联物 | CWBIO | CW0103S | |
| ELISA | 睾酮ELISA试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | H090-1-2 |
| FSH ELISA试剂盒 | Nanjing Jiancheng Bioengineering Institute | H101-1-2 | |
| 酶标仪 | BioTek | Synergy H1 | |
| TUNEL | 一步法TUNEL凋亡检测试剂盒 | Beyotime | C1089 |
| DAPI | -- | -- | |
| Western blot | RIPA裂解液 | -- | -- |
| BCA蛋白定量试剂盒 | TAINGEN | PA115 | |
| 硝酸纤维素膜 | Boster | AR0135-04 | |
| 抗ABP抗体 | Proteintech | 18200-1-AP | |
| 抗BCL2抗体 | Proteintech | 12789-1-AP | |
| 抗BAX抗体 | Proteintech | 50599-2-Ig | |
| 抗CASP3抗体 | Proteintech | 19677-1-AP | |
| 抗细胞色素c抗体 | Proteintech | 10993-1-AP | |
| 抗FSHR抗体 | Proteintech | 22665-1-AP | |
| 抗GDNF抗体 | BIOSS | bs-23586R | |
| 抗LC3抗体 | Servicebio | GB11124 | |
| 抗p62抗体 | Proteintech | 18420-1-AP | |
| 抗PCNA抗体 | Abcam | ab18197 | |
| 抗SCF抗体 | BIOSS | bs-0545R | |
| 抗WT1抗体 | Proteintech | 12609-1-AP | |
| 山羊抗小鼠IgG/HRP偶联物 | CWBIO | CW0102S | |
| 山羊抗兔IgG/HRP偶联物 | CWBIO | CW0103S | |
| ECL底物 | Thermo Fisher Scientific | 34095 | |
| GAPDH抗体 | Proteintech | 10494-1-AP | |
| TEM | 醋酸铀酰 | -- | -- |
| 柠檬酸铅 | -- | -- | |
| HT7700透射电子显微镜 | Hitachi | -- | |
| 显微镜 | CKX53SF显微镜 | OLYMPUS | CKX53SF |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物与样本采集 | 品种、年龄、季节选择、饲养条件、样本量、精液采集方法 阅读提示:Materials and methods: Animals; Collection of semen and blood samples |
| 精液分析 | 电刺激频率、每次精液量、技术重复数、评估指标 阅读提示:Materials and methods: Collection of semen and blood samples |
| 激素检测 | 血清分离条件、ELISA试剂盒、检测范围、重复性 阅读提示:Materials and methods: Enzyme-linked immunosorbent assays |
| 组织学与免疫组化 | 固定方式、切片厚度、抗体稀释度、抗原修复条件、显色方法 阅读提示:Materials and methods: Histology and immunohistochemistry |
| 凋亡检测 | 试剂盒、DAPI浓度、计数标准 阅读提示:Materials and methods: TUNEL assay |
| 蛋白表达分析 | 组织裂解方法、蛋白定量方法、上样量、抗体稀释度、内参 阅读提示:Materials and methods: Protein extraction and western blot |
| 自噬检测与超微结构 | 固定液、切片厚度、染色方法、电镜型号、自噬体计数标准 阅读提示:Materials and methods: TEM assay; Autophagy is involved in seasonal spermatogenesis |