茄病镰刀菌在真菌性角膜炎中激活PANoptosis并调节免疫反应

目的：本研究旨在探讨茄病镰刀菌如何在真菌性角膜炎中触发PANoptosis，并研究脱氧雪腐镰刀菌烯醇对人角膜上皮（HCE-T）细胞的毒性作用及其潜在机制。方法：通过角膜基质内注射真菌孢子建立茄病镰刀菌角膜炎小鼠模型。使用标准化评分系统评估临床严重程度。通过蛋白质印迹、免疫荧光和TUNEL分析角膜组织中的PANoptosis标志物。实时PCR定量炎症细胞因子。RNA测序用于筛选差异表达基因并分析免疫细胞浸润谱。HCE-T细胞暴露于DON，通过蛋白质印迹和免疫荧光检测PANoptosis相关蛋白。使用RNA测序分析基因表达变化。结果：通过感染角膜中cleaved caspase-1、-3、-7和-8、gasdermin D、磷酸化混合谱系激酶结构域样蛋白表达上调以及TUNEL阳性细胞增多，验证了PANoptosis的激活。炎症细胞因子（IL-6、IL-1β、TNF-α）显著上调。RNA测序揭示了PANoptosis、免疫反应和细胞外基质组织的显著变化。免疫浸润分析表明感染角膜中M1巨噬细胞显著增加。体外实验表明，DON暴露增加了HCE-T细胞中PANoptosis标志物（cleaved caspase-1、-3、-7和-8；BAX；GSDMD；和p-MLKL）以及炎症细胞因子（IL-6、IL-1β、IL-18、TNF-α）的上调。RNA测序进一步揭示了DON处理的细胞中核糖体RNA加工和细胞外基质组织途径的改变。结论：茄病镰刀菌感染和DON暴露在真菌性角膜炎中诱导PANoptosis，导致显著的炎症反应。这些结果表明，靶向PANoptosis信号通路可能代表治疗真菌性角膜炎的一种新方法。