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技术资料/正文
关于荧光素酶互补成像技术的（LCI）的常见问题与解答
3621 人阅读发布时间：2023-08-21 20:11
荧光素酶互补成像技术的（LCI）可以在生物体内直接检测蛋白质之间的相互作用，其基本原理是在分子水平上通过荧光素酶互补形成光信号，进而可视化蛋白质相互作用。在使用荧光素酶互补成像技术的（LCI）技术时，常常会遇到一些问题，以下是常见问题及解答：
1、荧光素酶互补成像技术的（LCI）技术中荧光素酶片段如何选择？
LCI技术中常用的荧光素酶片段有NLuc和CLuc。可以根据实验需要和研究目的选择合适的荧光素酶片段。常用的选择是将NLuc标记在蛋白质的N-末端，CLuc标记在C-末端或内部。
2、如何避免LCI实验中荧光素酶片段的自发组装？
在进行实验前应进行对于荧光素酶片段的互补性检查。还可以进行对照实验，即将两个荧光素酶片段分别与靶蛋白进行实验，以排除假阳性信号的影响。
3、LCI实验中如何制备细胞样品？
LCI实验中需要获取含有被测蛋白的细胞样品。通常的制备方法是将细胞在含有荧光素酶反应物的缓冲液中进行处理和检测。
4、LCI实验中如何分析荧光光谱？
可以使用荧光分析仪或其他适用的设备来检测LCI实验样品，并使用标准曲线或反应速率来确定能够检测到的信号强度范围。通常需要对所得的荧光光谱进行影像增强处理后进行分析。
5、LCI实验最大的优势是什么？
LCI可以实现活体细胞内实时、定量分析，不受植物自发荧光的干扰；不需要裂解细胞提取蛋白质就可以很好的反映植物生理条件下蛋白的互作状态。