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技术资料/正文
关于双分子荧光互补技术（BiFC）的常见问题与解答
1839 人阅读发布时间：2023-08-21 20:09
双分子荧光互补技术（BiFC）是一种常用的蛋白质相互作用检测方法，它通过将两个不会相互作用的荧光蛋白的两个片段标记到被测蛋白的两个部分上，形成一个双分子体系。在这个体系中，只有当被测蛋白相互作用时，才能使两个荧光蛋白的片段结合，从而产生荧光信号。在使用双分子荧光互补技术（BiFC）时，常会遇到一些常见问题，下面是其中的一些问题和解答：
1、双分子荧光互补实验中如何选择合适的荧光蛋白？
通常使用GFP (Green Fluorescent Protein)标签蛋白 或者RFP (Red Fluorescent Protein)标签蛋白，但不同类型和种类的蛋白质可能需要不同类型的荧光蛋白来实现更好的检测和观察。需要具体的蛋白具体分析。
2、如何避免荧光蛋白片段的自发组装？
在进行实验前应该检查荧光蛋白的两个片段，以确保它们之间的互有独立，不会自发地结合产生荧光。可以进行对照实验，即将荧光蛋白片段分别与靶蛋白互相结合，以排除假阳性信号的影响。
3、双分子荧光互补实验中如何避免假阴性的产生?
假阴性的产生可能与组织在处理、高浓度荧光物质、受检测蛋白输入量等有关。为了避免假阴性的产生，可以对实验进行反复优化，并配合采集更多的样品供试验。
4、双分子荧光互补实验是否具有其他的优势?
双分子荧光互补技术（BiFC）除了可以直观的观察到两个蛋白的相互作用外，还可以直接观察到目的蛋白互作的场所（比如：在叶绿体互作，在细胞膜互作，在细胞核互作等等）。