细胞避坑指南 · 第01期 |支原体：细胞房里最贵的"隐形房客"

       WB条带突然变弱、qPCR的Ct值莫名飘移、细胞越养越"蔫"，偏偏培养基清亮得像新配的——先别急着怀疑自己的手法，你的细胞房里可能住进了一位"隐形房客"。

作为「细胞避坑指南」开栏第1期，我们把支原体这件事一次讲透：它怎么进来、怎么搞砸你的实验、又怎么把它彻底请出去。

1看不见≠不存在，双抗也防不住

· 支原体直径只有0.1~0.3μm，没有细胞壁，能穿过0.45μm滤膜，部分甚至能挤过0.22μm滤膜——常规的过滤除菌对它常常失效。

· 它不像细菌、真菌那样让培养基浑浊变黄：培养液照常清亮，pH照常稳定，几乎不留现场。

· 据信息调查，70%以上的细胞培养物存在不同程度的支原体污染。

· 最扎心的一条：实验室常年添加的青霉素-链霉素双抗，作用靶点是细胞壁，而支原体压根没有细胞壁。双抗防支原体，等于给贼装了把假锁。

2它不杀细胞，专偷实验数据

支原体吸附在细胞膜表面，短期内看不出细胞死活，但已被研究证实的破坏清单相当长：

· 抑制细胞生长，改变细胞代谢；

· 干扰DNA、RNA和蛋白质的合成水平；

· 诱导染色体畸变；

· 改变细胞膜表面抗原、受体表达和信号转导。

3培养基"清亮"，是最大的错觉

· 培养基清澈透亮≠细胞健康，支原体恰恰以"培养基干净"作掩护。

· 早期信号藏在细节里：细胞间隙出现小颗粒和碎片、胞质空泡、伪足减少、贴壁变差、倍增时间悄悄拉长。

· 光靠显微镜下"感觉还行"，几乎不可能发现它。

4检测别只赌一种方法

· 培养法：经典但慢，需要约28天才能下结论；

· DNA荧光染色（如Hoechst 33258）：看核外荧光点，结果依赖经验；

· PCR/qPCR法：快、灵敏，是目前实验室筛查的主流选择。

5中招别急着扔，抢救有通道

很多人的第一反应是扔掉细胞。对珍贵细胞株来说，其实有一条"抢救通道"：

① 胞内外双清——Bacteria Rid支原体清除剂（FH5001）

富衡第三代配方，抗菌肽（AMPs）+穿膜肽（CPPs）组合。AMPs清除细胞外的支原体和常见细菌，CPPs携带AMPs进入细胞内部，把藏在胞内的支原体一起端掉。

② 重度污染攻坚——支原体清除剂（抗生素型）

按1:1000使用，处理期间细胞密度保持在50~60%，PBS洗净后换含药培养基，1~2天换液一次，连续处理1~2周。已在上百种细胞上完成毒性验证；细胞敏感时可降浓度或间歇处理。

③ 断掉环境源头——细胞清了、房间没清，等于白清

细胞金盾-细胞房除菌剂（FH3001）直接喷洒台面与空间，对细菌、真菌、支原体均有清除效果，对芽孢孢子的抑制可长达7-10天；水浴锅也别放过，水浴锅抑菌剂（FH3004）按1:1000加入，每7-10天处理一次。

✓本周就能做的5件事

① 新细胞到货：先隔离培养，做完支原体检测和STR鉴定，再进主培养区。

② 一次只操作一种细胞系，吸管现用现取，杜绝气溶胶交叉。

③ 培养箱水盘、水浴锅定期清洁，水浴锅按1:1000加入抑菌剂，7-10天一次。

④ 主培养细胞系每月qPCR抽检一次，冻存前必检。

⑤ 中招后：细胞用清除剂处理，房间同步用除菌剂，双线一起断源。

盾这一期提到的污染防线产品

 

Bacteria Rid 支原体清除剂

货号 FH5001

第三代配方，AMPs+CPPs胞内外双清，3天清除细胞内外支原体。

支原体清除剂（抗生素型）

货号 FH5004

重度污染攻坚，1:1000使用，上百种细胞毒性验证。

细胞金盾-细胞房除菌剂

货号 FH3001

喷洒细胞房台面与空间，芽孢孢子抑制长达7-10天。

水浴锅抑菌剂

货号 FH3004

按1:1000加入水浴锅，每7-10天处理一次，无毒无耐药。

支原体的可怕，不在于杀死细胞

而在于让每一个数据都变得可疑

看不见≠不存在；清亮≠干净；清细胞，更要清房间。

定期检测、环境防控、及时清除——三道防线立住了，"隐形房客"就再也没有落脚的地方。

污染防线系列第02期：真菌孢子突袭细胞房

"看得见的污染"怎么在48小时内止损？下一期拆给你看。

你在细胞房踩过什么坑？评论区聊聊，下期可能就是你的选题。

支原体检测试剂盒、清除剂与细胞房环境消毒产品，详询富衡生物（fudancell.com）