上海富衡 | ATDC5成软骨诱导7天后，培养基快速变黄是什么情况
在ATDC5成软骨诱导分为前期（0-7天）、中期（7-14天）、后期（14天到完成期间）。在诱导第7天往后（前期过后），诱导会出现各种各样的问题，如培养基快速变黄（1天内）。这种情况通常是细胞代谢异常活跃或存在毒性 、污染等问题。
现象造成原因
1、细胞密度过高，代谢超负荷
成软骨诱导需细胞高密度，但诱导7天后细胞可能已过度增殖或形成软骨结节，导致：
营养消耗激增（葡萄糖、氨基酸），乳酸等酸性代谢产物快速积累；
贴壁细胞或结节中心细胞因缺氧 / 营养不足而死亡，释放内容物加剧 pH 下降。
显微镜观察细胞密度，若结节过大或贴壁细胞融合度＞90%，需怀疑此原因。
2、试剂浓度过高、失效或品质异常
诱导添加物通常有一定使用浓度来辅助细胞进行诱导分化，但超量可能促进细胞过度增殖，加速代谢或产生毒性导致细胞应激死亡。
诱导添加物基本都含有一定的生物活性，如果长时间暴露在常温中或未进行避光保存，就会导致整个诱导试剂失效并产生毒性。建议将不同的添加物保存在相应温度内（有些试剂需要放置在-20℃保存），诱导试剂现配现用、分批配置。
批次差异、品质较差的试剂可能会对细胞毒性（尤其试剂内含微量元素，超量易中毒）。
3、培养基类型或缓冲能力不足
成软骨诱导多用高糖 DMEM（含酚红，pH 敏感），但需注意：
若使用无 HEPES 缓冲体系的培养基，仅靠碳酸氢盐缓冲，在开放式培养（5% CO₂）中 pH 稳定性较差；
诱导 7 天后，培养基中原有缓冲物质已消耗殆尽，新增 2mL 培养基可能缓冲能力不足。
4.污染或操作问题
污染排查：
细菌 / 真菌污染：培养基可能浑浊，但酸性代谢也可能仅变黄（需镜检观察是否有悬浮颗粒）；
支原体污染：典型表现为细胞状态差、代谢异常，需用检测试剂盒确认。
操作问题：
加液时未预热培养基（＜37℃），刺激细胞应激；
液体直接冲击细胞或结节，导致机械损伤和内容物释放。
201 人阅读发布时间：2025-05-27 09:38
