基因表达调控之研究专题

ChIP 试剂盒

   2015-06-04
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染色质免疫沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,简称ChIP)是研究体内蛋白质与DNA相互作用的一种技术。其原理是:在生理状态下用甲醛把细胞内的DNA与蛋白质交联在一起,通过超声或酶处理将染色质切为均一的小片段后,利用抗原抗体的特异性识别反应,使用DNA结合蛋白特异性的抗体将目的蛋白和DNA复合物沉淀下来。复合物经过洗涤,解交联,蛋白酶K消化去除DNA结合蛋白,经纯化得到感兴趣的DNA片段。纯化的DNA片段可用于后续的分析,比如qPCR,测序,ChIP-chip,ChIP re ChIP等。

Biosense公司的ChIP试剂盒可以使用超声法或酶切法进行染色质的断裂处理。每种方法都提供快速、可重复的操作步骤,省时省力,实验者更容易获得成功的ChIP结果。

【产品形式】:伯信生物为您提供的 ChIP试剂盒产品内包含了ChIP实验所需的所有试剂和相关组份。简单快捷的方案设计和优化的试剂配比,为全球科研工作者提供最优的 ChIP实验分析方案。

【ChIP试剂盒的优点】:

●组分完整——提供ChIP实验所需的所有试剂;

●可用于检测蛋白/DNA的相互作用,不仅仅限于组蛋白的修饰;

●与全基因组分析或PCR相关的方法兼容;

●无需进行试剂和操作步骤的优化;

●无需酚/氯仿抽提步骤——试剂盒包含DNA纯化柱,可对DNA进行快速纯化。

传统的ChIP实验都是使用染色质组成相关的抗体,如乙酰化组蛋白抗体。然而对于启动子转录活性分析而言,这无法揭示出是哪种转录因子结合到我们感兴趣的启动子上。相比之下,使用转录因子特异性抗体,能够直接监测转录因子和DNA的相互作用,但是这种技术与传统的ChIP相比具有更大的挑战,需要准备多种复杂的缓冲液,抑制剂混合物和封闭试剂等。而且在缺少抗体、对照和验证的实验流程下,很难对ChIP结果进行验证。为了解决这些问题,使得ChIP实验同时适用于转录因子和组蛋白,Biosense公司的ChIP试剂盒提供ChIP实验所需的所有试剂,包括阳性对照和阴性对照,使得研究者更容易成功的操作ChIP。典型的ChIP实验每次需要2×106个细胞,使用ChIP试剂盒,仅需要1×105或更少的细胞既可获得阳性的ChIP结果。

用1%的甲醛固定Hela细胞10分钟,使用超声法破碎染色质,使用阴性对照IgG和RNA pol II抗体,对不同细胞数量来源(1×105到7.5×106个细胞)的染色质进行ChIP,重复2次。使用阳性对照引物GAPDH对ChIP后的DNA进行36个循环的PCR分析。取10ul PCR产物进行1%凝胶电泳,EB染色后紫外观察。结果显示与使用阴性对照IgG相比,使用RNA pol II抗体的ChIP大量富集了GAPDH启动子区域的DNA序列。

chip 试剂盒.jpg


编辑: weicf    来源:丁香园

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