同型对照——用还是不用？什么时候用？

2017-08-24

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1. 当检测的指标是非常明显的分离双峰时，那就不需要使用同型对照。如果检测外周血中的 T 细胞和 B 细胞，那么也可以通过设门来确定细胞种类。

2. 如果是检测培养的细胞系，同型对照可以提供细胞内在粘稠度的信息，然而这并不异味着要从特异性指标样品中扣除荧光密度或阳性百分比相应的值，在该实验步骤中该同型对照对应的值只是简单的粘性含量定量检测和有效的封闭。

3. 如果进行多色检测实验，要注意光谱重叠，最好通过少加一个荧光抗体来进行调节（FMO，fluorescence-minus-one），该调试包括去除光谱重叠影响最大的荧光抗体以外的所有抗体。

4. 在实验中，同型对照决不能用来确定阳性或阴性细胞，或用作设门的对照。

5. 避免阴性抗原群背景染色很高的最好方式是小心地滴定试剂，以确保荧光明亮群有很高的阳性信号，同时阳性信号在阴性群降低。

6. 如果使用同型对照还出现了很高水平的未预期染色，此时应该检查一下实验方法中的封闭步骤。对于骨髓细胞染色是否对使用了 Fc 封闭？是否尝试在缓冲液中加入过量血清或加入全血清？这些方法都有助于减少非特异性吸附。

7. 怎么区分抗体非特异性吸附和荧光非特异性性吸附？可以通过使用亚克隆型对照鉴别。如果在染色区加入过量非荧光标记的单克隆抗体，荧光减弱，证明是荧光非特异性吸附；如果荧光没有减弱，则是抗体非特异性结合。

8. 对于细胞信号传导和细胞因子染色，除了 FMO 对照，同时也不要忽视生物负调控，比如细胞是否未受刺激，或是否经过磷酸化抑制剂处理。

9. 不要忘记在多色实验中使用细胞活性染料。无论对于活细胞还是固定的细胞这些染料在细胞增殖中显示不同颜色，这可以为实验提供非常好的验证。活性染料对去除死细胞对抗体的非特异性结合是必需的。

编辑： weicf 来源：丁香园