关于细胞转染 你知道多少?
细胞转染是指将外源分子如 DNA RNA 等导入真核细胞的技术。可分为瞬时转染,稳定转染等瞬时转染是指外源 DNA/RNA 不整合到宿主染色体中,因此一个宿主细胞可存在多个拷贝数,产生高水平的表达,但通常只持续几天,多用于启动子和其他调控元件的分析。一般来说,超螺旋质粒 DNA 转染效率较高,在转染后 24-72 h 内分析结果,常常用到一些报告系统如荧光蛋白,β半乳糖苷酶等来帮助检测。稳定转染是指外源 DNA 既可以整合到宿主染色体中,也可能作为一种游离体 ...
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转染细胞的稳定筛选
1.确定抗生素作用的最佳浓度: 不同的细胞株对各种抗生素有不同的敏感性,因此在筛选前要做预试验,确定抗生素对所选择细胞的最低作用浓度。①提前 24 小时在 96 孔板或 24 孔板中接种细胞 8 孔,接种量以第二天长成 25%单层为宜,置 CO2 孵箱中 37℃培养过夜。② 将培养液换成含抗生素的培养基, 抗生素浓度按梯度递增0(50 100 200 400 600 ...
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你可能提过很多质粒 却不一定知道这些
经常提质粒吗?熟练之后,提质粒乃至质粒构建都很简单。但如果真问起一些质粒的细节,可能很多人回答不了。不信随我看看。质粒组成要素一个合格的质粒含有以下组成部分:复制起始位点 Ori 即控制复制起始的位点。原核生物 DNA 分子中只有一个复制起始点。而真核生物 DNA 分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测,如 Amp+ 、Kan+。多克隆位点 MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加 poly(A)信号 可以起到稳定 mRNA 作用如 ...
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基因转染实验(脂质体介导DNA转染法)
脂质体(lipofectin regeant,LR)试剂是阳离子脂质体N--n, n,n-Trimethylammonium Chloride(DOTMA)和Dioleoyl photidye-thanolamine(DOPE)的混合物。它适用于把DNA转染入悬浮或贴壁培养细胞中,是目前条件下最方便的转染方法之一。转染率高,优于磷酸钙法,比它高5~100倍,能把DNA和RNA转染到各种细胞。
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