质粒扩增流程

质粒扩增，简单说就是让质粒在大肠杆菌里大量复制，再提取出来。流程分六步：

1. 转化。把质粒转入感受态细胞，常用DH5α。冰浴、热激、复苏，涂到含对应抗生素的LB平板上，37℃过夜。

2. 挑单克隆。第二天挑一个独立、饱满的单菌落，接种到含抗生素的LB液体培养基里，37℃摇菌。

3. 扩大培养。按1:100到1:1000转接到新鲜LB，37℃摇到OD600约0.6-0.8，或直接过夜扩增。高拷贝质粒过夜即可，低拷贝质粒可适当延长。

4. 收菌。离心收集菌体，弃上清。

5. 提质粒。用碱裂解法或离心柱试剂盒提取。

6. 鉴定。跑琼脂糖凝胶看超螺旋比例，UV法测浓度和A260/A280，必要时酶切或测序验证。

关键点：抗生素不能加错，全程无菌操作，甘油菌避免反复冻融。做慢病毒包装或细胞转染，建议用去内毒素高纯度质粒。