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索莱宝研发
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实验简介
糖类物质是构成植物体的重要组成成分之一，也是新陈代谢的主要原料和贮存物质。总糖是指样本中的还原单糖及在本法测定条件下能水解成还原单糖的蔗糖、麦芽糖和可部分水解为葡萄糖的淀粉。 检测原理为蒽酮比色法。可用于可溶性单糖、寡糖和多糖的含量测定，具有灵敏度高﹑简便快捷﹑适用于微量样本的测定等优点。
实验步骤
溶液的配制： 1.标准品：含 10mg 无水葡萄糖（干燥失重<0.2%），临用前加入 1mL 蒸馏水溶解，配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液备用，2 - 8℃保存 2 周，或者用饱和苯甲酸溶液溶解，可保存更长时间。 2.工作液的配制：在 1 瓶试剂一中加入 5mL 试剂二，充分溶解后使用，如较难溶解，可加热搅拌（用不完的试剂 2 - 8℃保存 1 周）。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献） 称取约 0.1 - 0.2g 样本，加入 1mL 蒸馏水研磨成匀浆，倒入有盖离心管中，沸水浴 10min（缠封口膜，防止爆盖），冷却后，8000g 常温离心 10min，取上清液于 10mL 试管中，用蒸馏水定容至 10mL，摇匀备用。 二、测定步骤 1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 620nm，用蒸馏水调零。 2.调节水浴锅至 95℃。 3.标准品的制备：将标准品用蒸馏水稀释至 0.2、0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625mg/mL ，具体稀释比例可参考说明书。 4.加样（在 EP 管中反应）： 空白管：加入 400μL 蒸馏水、100μL 工作液、1000μL 浓硫酸。 测定管：加入 200μL 样本、200μL 蒸馏水、100μL 工作液、1000μL 浓硫酸。 标准管：加入 200μL 标准品、200μL 蒸馏水、100μL 工作液、1000μL 浓硫酸。 加样后混匀，置于 95℃水浴中 10min（缠封口膜，防止爆盖），冷却至室温后，在 620nm 处测定吸光值，分别记为 A 空白管、A 测定管、A 标准管 ，并计算 ΔA = A 测定管 - A 空白管、ΔA 标准 = A 标准管 - A 空白管 。（空白管和标曲只需做 1 - 2 管 ） 三、可溶性糖含量计算 1.标准曲线的建立：根据标准管的浓度（x，mg/mL）和吸光度 ΔA 标准（y，ΔA 标准），建立标准曲线。再根据标准曲线，将 ΔA（y，ΔA）带入公式计算样本浓度（x，mg/mL）。 2.按样本质量计算：可溶性糖（mg/g 质量）=(x×V1)÷(W×V1÷V2)=10×x÷W 3.按样本蛋白浓度计算：可溶性糖（mg/mg prot）=(x×V1)÷(V1×Cpr)=x÷Cpr V：加入样本体积，0.2mL；V2 ：样本总体积，10mL；Cpr ：样本蛋白质浓度，mg/mL；W 为样本质量，g。
注意事项
1.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。 2.由于浓硫酸具有强腐蚀性，请谨慎操作。
