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实验简介
Pro 广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro 含量显著增加。Pro 增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。 用磺基水杨酸（SA）提取Pro，加热处理后，Pro 与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加甲苯萃取后，在520nm 测定吸光度。
实验步骤
溶液的配制： 1. 试剂一：自备冰乙酸，大约需要45mL，常温保存；试剂盒内提供一个30mL棕色空瓶，仅做分装使用，请自行标注试剂名称。 2. 标准品：脯氨酸10mg，临用前加入1mL蒸馏水，配成10mg/mL标准品。 一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可参考文献） 1.细胞、细菌或组织样本的制备 细菌或细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，弃上清；按每 500 万细菌或细胞加入 1mL 提取液，用功率 200W 超声波破碎（超声 3 秒，间隔 10 秒，重复 30 次），之后置沸水浴振荡提取 10min（缠封口膜防暴盖）；10000g 常温离心 10min，取上清，冷却后待测。 组织：称取约 0.1g 组织，加入 1mL 提取液进行冰浴匀浆；之后置沸水浴振荡提取 10min（缠封口膜防暴盖），10000g 常温离心 10min，取上清，冷却后待测。 2.血清（浆）样本：取 100μL 血清（浆）加入 0.9mL 提取液，充分混匀，之后置沸水浴振荡提取 10 分钟（缠封口膜防暴盖），10000g 常温离心 10 分钟，取上清，冷却后待测。 二、测定步骤 1.分光光度计预热 30min 以上，调节波长至 520nm，用蒸馏水调零。 2.标准品的处理：将标准品用蒸馏水稀释为 40、20、10、8、4、2、1、0.5μg/mL 。 3.测定管：加入 0.5mL 上清液、0.5mL 试剂一、0.5mL 试剂二。 标准管：加入 0.5mL 标准品、0.5mL 试剂一、0.5mL 试剂二。 空白管：加入 0.5mL 蒸馏水、0.5mL 试剂一、0.5mL 试剂二。 操作：混匀后盖紧盖子，缠好封口膜，置于沸水浴中保温 30min，每 10min 振荡一次，冷却后在 520nm 波长处比色，记录吸光值计算 ΔA（测定管 - 空白管，标准管 - 空白管 ），空白管只需做 1 - 2 次。 三、Pro 含量计算 1.以标准溶液浓度为横坐标，ΔA 标准为纵坐标绘制标准曲线，得到线性回归方程 y=kx+b，将 ΔA 代入方程得到 x（μg/mL ）。 2.按照细菌、细胞数量计算：Pro 含量 (μg/10⁴cell)=x×V 提 ÷ 细胞 / 细菌数量 = x÷ 细胞 / 细菌数量 3.按照组织质量计算 ：Pro 含量 (μg/g 质量)=x×V 提 ÷W=x÷W 按血清（浆）体积计算：Pro 含量（μg/mL）=10×x V 提：加入提取液体积，1mL；W：样本质量，g；细胞 / 细菌数量：以 10⁴为单位，万个；10：血清稀释倍数，(0.1 + 0.9)÷0.1 = 10。
注意事项
1.提取液中含有蛋白沉淀剂，提取的上清液不能用于蛋白浓度的测定。 2.如果测定吸光值超过线性范围吸光值，可以增加样本量或者稀释样本后再进行测定。
