ELISA试剂盒操作方法

1.ELISA试剂盒检测前准备工作
①ELISA试剂盒信息核对
核对试剂盒外标签信息，例如，试剂盒检测指标中英文是否正确，产品货号是否对应，试剂盒应用次数（16T、48T或96T）是否正确等。
②检查试剂盒组分和试剂盒恢复室温
提前30分钟试剂盒，平衡至室温(18-25℃)。按照说明书检查试剂盒组成主要包括试剂盒组分的名称、数量、规格是否与说明书一致，并仔细阅读试剂盒说明书。
③配制试剂工作液
配制试剂包括标准品工作液配制、洗涤液工作液配制。
2.ELISA试剂盒检测步骤
①包被抗体恢复构像
ELISA试剂盒恢复至室温，加入标准品/样本前，请用洗涤液工作液洗板3次并甩干。
②标准品或样品加样
分别设定标准孔、空白孔和样本孔。标准孔加入100μL倍比稀释的标准品，空白孔加入100μL标准品/样本稀释液，其余孔加入100μL待测样本。给酶标板覆膜，37℃孵育90分钟。
③酶标板洗涤
37℃温箱孵育结束后，取出酶标板，甩尽孔内液体。加入配好的洗涤液工作液，每个反应孔加入250μL 洗涤液，室温静置10-30 s，将洗涤液液弃去，并在无毛絮吸水纸或毛巾进行甩干拍板5-10次。 此步骤，共进行洗板4次。
④生物化抗体稀释及加样
配制生物素化抗体工作液，每孔100μL加入到洗涤好的酶标板中。然后，进行37℃温箱孵育60 min。
⑤酶结合物稀释及加样
孵育完成后，进行与上述相同的洗板操作。配制酶结合物工作液，每孔100μL加入到洗涤好的酶标板中。然后，进行37℃温箱孵育30 min。
⑥显色底物显色
孵育完成后，进行与上述相同的洗板操作。每孔100μL加入TMB显色试剂溶液，加入到洗涤好的酶标板中。然后，进行37℃温箱孵育30 min。
孵育完后，酶标板内溶液由无色变为不同程度的蓝色溶液，里边的显色溶液切记不能弃去。
⑦终止显色
终止反应，取出终止液，每孔50μL加入到显色好的酶标板中。反应孔中溶液颜色由蓝色变为黄色溶液，表明，终止反应正常。
⑧酶标仪读取数据
最后，酶标仪预热后，终止反应5min内进行酶标板反应孔读取反应孔450nm吸光值数据，保存数据并分析，结束ELISA试剂盒实验。