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问
设计好的引物如何在NCBI 上比对?
goleo
引物比对在ncbi主页www.ncbi.nlm.nih.gov/上点blast,然后选择左上角那个版块里的search for short,nearly exact matches,输入上游引物序列,在下一行输入下游引物序列,选择你要看的种属(没有特殊要求就选择nr),点submit,在下一个窗口中点format,就可以了。这样是看一对引物的特异性。
5 回答
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问
引物合成引物有两个Tm值,如何确定PCR的退火温度?
zcldf001
以第一对引物为例:主要的问题是上游引物有稳定的loop,需要提高退火温度,引物只有打开二级结构后才能有效与模板结合。但是提高退火温度也会降低引物与模板结合的效率,这样就需要同时增加引物的量。摸索退火温度是要参考Tm,不确定各个公司引物合成单上的计算方法,你说的两种Tm是不同盐离子浓度条件下计算的:0.05M Na是指一般PCR体系中的盐离子浓度,因为大多数Taq PCR体系含50mM KCl。用o
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