实验问答

21,790,651 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问老板叫测酵母的海藻糖含量，试剂盒里说明细胞/细菌使用超声破碎法破裂细胞，但是实验室没有超生破碎仪，该用什么方法破碎酵母呢？

府宅

使用0.22um玻璃珠震荡破碎酵母，这种破碎效果蛮好的，还经济

5 回答606 围观

问为什么药物对肿瘤细胞突然没效？

府宅

会不会与每个孔中细胞的数目有关系？如果你每个孔中细胞数目与文献采用的细胞数不一样，也会导致抑制率不同。还有细胞还受培养环境的影响，温度溶剂都与文献报道的一致吗？并且实验的干扰因素也很多，建议每一批次做三次重复实验。多设置几个药物梯度（一般都是做九个梯度）；24h和48h接种不同的细胞密度。

5 回答744 围观

问目的蛋白15KD左右，一直没跑出来，内参β-actin一直都有，转膜试过衡流220 40min，也试过20V 15min

小熊纯一郎

百分之15的胶，不用跑到底，15的条带位置分开就行，转膜用0.22微米的膜，转40分钟左右，跑胶时可以把那个机器泡冰水里，降低电泳液温度，转膜时转膜液预冷。增加蛋白上样量，增加一抗浓度，或者换别的品牌的一抗。我觉得主要问题在于一抗，我们实验室0.45的膜，0.22的膜，pvdf膜，nc膜，还有转膜时间少到40min或者多到2小时，是都可以将小分子跑出来的。我的第一建议是换一抗，或者加一抗浓度。

4 回答3852 围观

问covid-19男女差异

天一湖医者

男性血浆中的ACE2浓度要高于女性。此外，该研究还发现，心力衰竭患者服用RAAS抑制剂，例如血管紧张素转化酶（ACE）抑制剂或血管紧张素受体阻滞剂（ARBs），他们的血液中没有更高浓度的ACE2。

4 回答624 围观

问请问电泳时为什么会跑成这样，谢谢

飞天幻雪

胶配的有问题。正常情况下不会出现弥散这么严重的，如果还是这样建议所有试剂都用新的

3 回答483 围观

问腹腔注射的作用时间多久啊？我用重组蛋白去注射鱼，探究糖脂代谢过程，2-4h是合理的吗

dxy_gwrp7ndq

作用时间同药的半衰期是一样的。

2 回答637 围观

问取组织样品做WB需要灌流吗？？

未来9

需不需要什么灌流是根据你们实验安排吧和做WB没关系

4 回答819 围观

问分离支原体应如何选择培养基？

未来9

支原体常用培养基为PPLO,很多公司都有出售.但血清(常用马血清或猪血清)和抗生素(醋酸跎)需要自己添加.

4 回答503 围观

问WB重复不出相同结果是怎么回事？

未来9

问题出在每一步都有一定的可能性，比如电泳，转膜，敷抗体，显色等等。但据我所知，WB 最关键的还是转膜和敷抗体步骤，可能是你敷抗体的时候敷的不均匀。

4 回答1321 围观

问我的wb内参条带两边是翘起来的，请问怎么回事呢？

天一湖医者

电泳条带或整体出现 “︶ ”形状，可能原因主要包括两方面。一是电泳速度过快，可通过减少电压等减慢电泳速度。二是电泳温度过高，使得胶变形，可在冷室或者冰浴中进行电泳或者改变电泳pH。

5 回答2836 围观

问在做印迹实验多次出现信号低的情况怎么解决？

未来9

可能的原因及建议：①你所检测的样本中不表达目的蛋白，选择表达量高的细胞作为阳性对照，用于确定检测样本是否为阴性，同时查阅文献。②检测样本低表达目的蛋白，提高上样量，裂解液中注意加入蛋白酶抑制剂。③转移不完全或过转移，可以用丽春红染膜并结合染胶(考马斯亮蓝)后确定条带是否转至膜上或转移过头；适当调整转膜的时间和电流。④抗体不能识别测试种属的相关蛋白，购买抗体前应当认真阅读抗体说明书，确定其是否能够交

4 回答160 围观

问求助，生物聚类热图太大，插入论文里旁边的蛋白代号不清晰，怎么调？

xuchanglu88

这个时候可以不展示所有的蛋白代号，而是展示代表性的蛋白，一些代表性蛋白或者基因有时候就足以证明自己的point，具体操作可以使用AI进行调整。

3 回答645 围观

问做wb实验时怎么保证蛋白不被降解

未来9

1、样本制备过程中尽量保持低温,避免蛋白变性、降解；2、加入PMSF，抑制蛋白酶活性；

4 回答788 围观

问做wb半定量为什么内参总是调不一致

未来9

一：如果单独上样可以出现，可以排除蛋白本身的问题，但混合一起加时却跑的不齐，最大的可能就是胶的问题，胶配的不均匀导致蛋白跑的不在同一水平。二：就是抗体孵育问题，不知你是用孵育盒，还是用封膜孵育，一定要保证膜与抗体充分接触，保证孵育效果。三是显影剂是预混还是混合好的，注意混合比例

4 回答1227 围观

问we实验的时候，内参没出来，但是其他条带都很正常，而且符合结果，这样的结果是什么原因？可以用么？

dxy_91s7x0o6

内参一抗失效或二抗与内参一抗不匹配

4 回答425 围观

问什么情况下蛋白需要进行超声

未来9

看你的样品种类，细胞或细菌需要超声处理裂解蛋白

4 回答1048 围观

问请问WB电泳时跑成这样是为什么

天一湖医者

可能是蛋白量太大，或一抗浓度和时间太长，可根据情况调整蛋白量，同时一抗浓度和时间也可以缩短

3 回答405 围观

问做WB用预置胶跑maker条带很挤

天一湖医者

电压太小了，或者可以用较小浓度的胶试试

3 回答1281 围观

问wb实验，条带和背景颜色都很深，虽然能区分，但是样子不好看，是什么原因？

dxy_91s7x0o6

可能原因：一抗稀释度不合适，一抗或二抗封闭温度高，洗膜不充分

6 回答740 围观

问做southern时为什么用酶切产物来跑胶，而不是直接用基因组DNA跑胶呢

bamboopiggy

因为基因组DNA，需要将其切割成大小不同的片段，才能进行杂交，一般用限制性内切酶来切。

1 回答405 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序