实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问大鼠胎鼠脑原代细胞纯化？

dxy_gwrp7ndq

用神经干细胞特异性抗体———巢蛋白(Nestin)鉴定克隆细胞,用特异性的单克隆抗体鉴定克隆球诱导分化后的细胞。可获得了大量自我增殖并分化为神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的神经干细胞。

2 回答505 围观

问WB跑不出来内参蛋白怎么办

dxy_gwrp7ndq

检查封闭剂浓度是否使用正确，一般3%脱脂奶即可；重新稀释一抗，并降低二抗使用浓度；也可以通过发光Western marker来监控整个wb过程的正确性，如果发光western marker信号同样背景很重，基本判断应该是抗体孵育、洗涤步骤有问题，试剂要逐一排查。

4 回答1941 围观

问做细胞的过表达时，片段设计的最佳长度是多少？

bamboopiggy

这个取决于你的实验目的，看你要过表达的蛋白有多长啊，如果你问的是primer的长度，那至少要保证有15个以上的片段加酶切位点，加保护碱基，大概有25-30bp吧

3 回答380 围观

问跑蛋白配的一抗和二抗最多用几次？

bamboopiggy

看你用什么配的抗体，如果是牛奶，用2-3次吧，买个一抗稀释液可能会好一些。至于tlr4，你先看你抗体说明书上在什么位置吧，一般预测条带和实际条带会有差距

5 回答1252 围观

问拟南芥的结实率怎么计算？有什么标准

府宅

可以先将实粒数求平均值、总粒数求平均值,再用实粒数平均值除总粒数平均值100_

2 回答605 围观

问显影液会不会放久了效果变差？大概大半年的样子

bamboopiggy

只要你不把a液和b液混了，放四度避光保存用个1-2年没问题，就是千万注意，最好用不同的枪尖吸a b 液

4 回答1526 围观

问PCR样品太多时，同一样品的内参结果可以用在其他批次的样品中嘛？

zj佐罗

可以，但不提倡，如果你是老鸟，手法稳（指批次差异不大）可以用，如果菜鸟，建议每次做内参。

4 回答336 围观

问提取的原代骨髓源性巨噬细胞能传代使用吗？

bamboopiggy

不能传代使用，需要诱导7天，才能做实验

3 回答1095 围观

问A549细胞转染质粒效果差，如何提高转染效率？

府宅

A549细胞可以用RFect小核酸转染试剂，有国际专利的，转染效率可以做到90%以上，而且细胞死的也比较少。

3 回答745 围观

问请问大家，P62跑出来总是2条带是因为降解了吗，其中有个样本内参有但所有目的蛋白都没有

bamboopiggy

5号蛋白大概率降解了。p62你两条带的趋势一致，问题不大，可以用

3 回答1356 围观

问原核表达蛋白，出现条带大小不对怎么办？

未来9

通常就是以下两个原因的:一是蛋白本身有问题，另一个就是在实验过程中降解了

3 回答1612 围观

问各位老师跑cleaved caspase3是怎么跑的呀，为啥我跑了3次都是白板？

dxy_gwrp7ndq

可能是你分离胶的浓度不对，有预染marker的话，可以加一道预染marker。

3 回答790 围观

问同一个抗体在不同组织中出现条带不同的原因？

天一湖医者

关键在于成像的过程。同一张膜，可以在成像的时候，做出完全不同的图片结果。显色液的滴加，量，以及曝光时间，条带颜色（要求灰色而不是黑色）。所以最好有图片说明问题。

3 回答271 围观

问核酸斑点杂交，杂交袋的使用

bamboopiggy

去某宝买个封口机就可以啊，封口机是标配

3 回答616 围观

问用软件进行PCR引物设计时，怎么确保产物长度，怎么设计可以让引物在目的基因起始端

zj佐罗

直接在基因起始点选定引物，设定产物长度。

3 回答931 围观

问跑电泳时，结果不清晰咋办

府宅

原因有很多。第一，蛋白上样量可能太少了；第二，上样蛋白太杂了，没有纯净的条带；第三，上样蛋白含盐量或其他离子量太高；第四，配置的胶浓度不合适；第五，样品蛋白经过上样处理液处理的不够充分；第六，胶脱色后浸泡过久等等，还是要结合你自己试验的过程来分析才行

4 回答2004 围观

问WB条带有点宽呢，呜呜呜

zj佐罗

是蛋白没有分开？蛋白没有分开，可以考虑延长电泳时间，或是使用更大的胶，或是做浓度梯度的胶还是蛋白拖带？蛋白拖带，考虑先纯化蛋白，用高浓度胶进行电泳，电泳槽在电泳过程中放在冰水，保持低温，转膜过程也放在冰水中进行，防止降解。希望对你有帮助。

8 回答1701 围观

问蛋白转移不到膜上，但胶上有，同时Marker 转上去了，为什么？

bamboopiggy

可能你的转膜时间不够，试着延长一下转膜时间。

3 回答705 围观

问从左到右依次为input(5ul)、IgG(10ul)、IP(10ul)组。请问大家这样的IgG可以用吗？

bamboopiggy

如果实在找不到别的IgG了，这个可以凑合用，因为你实际ip下来的东西，比igG的要多，能说明问题。

4 回答632 围观

问为什么HepG2细胞在96孔板中长不起来？

生如夏花zzh

在加孔之前要吹匀，细胞活力也很重要。把细胞加入96孔板之前需要吹匀，加的均匀一点

7 回答3048 围观

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