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问
HEK293瞬转表达抗体活性偏低
bamboopiggy
你收的太晚了,瞬转一般48-72h就到表达高峰了,你提早收试试
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问
关于原代神经细胞培养细胞培养板?
bamboopiggy
将多聚赖氨酸稀释为0.1mg/ml,加入培养皿或将玻片浸入其中,5min,然后60度烘干1h,或室温干燥过夜
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问
干细胞纯度用流式细胞仪怎么看
bamboopiggy
如果cd90和cd105双阳的。就是在右上象限,然后有个百分比的读值可以直接看出来
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问
测空间沉降菌中平板菌落蔓延
天一湖医者
看下菌落轮廓,如果有明显界限,就分开计,没有的话算一个。
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问
关于原代细胞培养的问题?
心细北方
可能原因: 胰蛋白酶消化过度 ,支原体污染 ,培养基pH值过碱(NaHCO3分解) ,细胞老化 ,接种细胞起始浓度太低或太高 解决方法: 缩短胰蛋白酶消化时间或降低胰蛋白酶浓度 ,分离培养物,检测支原体。清洁支架或培养箱。如发现支原体污染,丢弃培养物。 使用无菌醋酸溶液调整pH值或充入无菌CO2
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问
跑WB时如何调节电压?
迟C迟
wb电泳电压电流及时间的选择:300mA90分钟,是1.0的胶厚度,要是0.75也行,但1.5mm的厚胶要时间长一些,另外做的蛋白如果超过100kd建议时间更长一些,若是小蛋白就减少转模时间,立春红确定最适时间。
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问
软蜱固定选择哪种固定剂,有无参考文献?
府宅
醛类(特别是戊二醛) 作为初级固定剂。使用戊二醛或戊二醛-多聚甲醛初步固定后再使用四氧化锇后固定的双重化学固定
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问
请问细胞传代时可以保留少量上清方便细胞适应新环境吗?
Topmicro
保留部分培养上清液可以促进细胞生长,但是我觉得你的主要问题不在这儿,可以更换血清试试。
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问
各位朋友,请问病毒反转录体系中加入RNA样本的量要怎么确定呢?
bamboopiggy
说明你的rna测得浓度有问题,你先看那你的rna的260/230,260/280 是不是在1.8-2.0之间,如果低于这个数值,说明你测得rna得浓度,比实际浓度要高,你需要改善你提的rna的质量。
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问
细胞复苏过程中,离心后混悬,用枪尖比较好还是用一次性巴士滴管比较好?
bamboopiggy
可以用巴氏滴管,只要能把细胞重悬起来,并且重悬的时候,冲击力不太大就好
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问
检测自噬抑制剂CQ和药物联用对细胞活力的影响
bamboopiggy
如果你要检测的是联合用药,那就不用提前用CQ预处理,因为你加进药物去以后,还有个作用时间啊,但是记得加单药的对照组。
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问
如何选择表达出蛋白的WB抗体?
科拜余萌
WB实验中使用到的有三种抗体:一抗、二抗和内参抗体。一抗是唯一针对目标抗原的抗体,可以进行制备也可以购买现货,难度系数较高;二抗直接买就OK,只是需要留意下种属选择;内参抗体必不可少,是WB实验中的质控环节。 WB检测之一抗 一抗制备 如果目的蛋白的现货抗体没有找到,或者都不中意,就需要亲自动手制备了,请公司帮你做也不错哦!自己制备一抗通常情况下可以选小鼠、兔制备多抗或者选小鼠制备单抗,前者省时省
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问
原代细胞和普通细胞放在同一培养箱中,会侵染其他细胞吗?
HALOsq
不会,除非你把你的细胞打翻在培养箱,况且,你所得的原代细胞都没有污染,那么怎么会污染其他普通细胞呢?
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问
可用于静电纺丝的材料筛选
小布丁瑶瑶
1聚氧化乙烯2 聚乙烯醇 3 聚乙烯吡咯烷酮 4 聚偏氟乙烯5 聚丙烯腈
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问
如何提高抗体染色的特异性呢?延长封闭时间和二抗时间可行吗?
大草原的小灰驴
1.提高一抗的稀释倍数,降低第一抗体的浓度2.把多克隆抗体换成单克隆抗体3.缩短孵育的时间4.延长封闭的时间
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问
原核纯化蛋白,IP纯化后的目的带比破碎后的上清的带弱,是什么原因
天一湖医者
是否考虑上样量过小 ,可增加上样量、降低一抗稀释度并延长曝光时间
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问
Pull-down对照组也能拉下来条带,是什么原因?
dxy_gwrp7ndq
反应的sample浓度不是越高越好,会造成洗脱困难,造成这样
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问
酵母双杂交实验过程中,是否需要用到内切酶,有要求吗
迟C迟
构载体的时候可能需要限制性核酸内切酶把目的基因连入目的载体。转入酵母菌之后就按正常的protocol,后面就不需要内切酶啦。
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问
LC3B的WB实验中,出现LC3B1 LC3B2两个条带,一般是使用LC3B2/1还是LC3B2与housekeeping蛋白比
天一湖医者
如果连内参都出现两条带,且彼此很接近,就要考虑是否是蛋白样本降解了;这是一般考虑使用LC3B2/1。
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问
实验小白,拜大神给看下这个免疫沉淀反应到底出没出结果?双向琼扩实验是不是只能定性,不能定量?
dxy_gwrp7ndq
双向琼脂扩散试验常用于定性检测,也可用于半定量检测
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