各位朋友，请问病毒反转录体系中加入RNA样本的量要怎么确定呢？

橙皮宝盒

2022-04-21

反转录时RNA质量浓度是两纳克，就加入了两微升样本，再用rnase水补齐10微升体系。到后续普通PCR检测时样本就扩增不出来了，核酸胶没有条带。但是，这个样本直接加入8微升时，后续的PCR扩增，核酸胶荧光条带就非常亮。

我就很疑惑，这个量到底是怎么确定的啊。

bamboopiggy

2022-04-21

有帮助

说明你的rna测得浓度有问题，你先看那你的rna的260/230，260/280 是不是在1.8-2.0之间，如果低于这个数值，说明你测得rna得浓度，比实际浓度要高，你需要改善你提的rna的质量。

天一湖医者

2022-04-21

有帮助

RNA起始量样本量范围，最佳起始量取决于目标序列的普遍性和反转录酶的灵敏性。以下可以参考图片描述

dxy_gwrp7ndq

2022-04-21

有帮助

40ul的体系，3ug 总RNA。invitrogen的反转录试剂盒范围是：1ng-5ug RNA。

府宅

2022-04-21

有帮助

测OD260,1个OD260值相当于40μg/ml RNA

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