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科研学霸天团,48小时有问必答
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猪肺原代巨噬细胞适合什么培养基,1640还是高糖
bamboopiggy
巨噬细胞一般算悬浮细胞,适合用1640养
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问
PCR 扩增的体系条件应该怎么摸?一般要先从哪项开始?为什么进行复合扩增体系条件就要重新摸?
bamboopiggy
如果你不想摸条件的话,可以在你正式pcr cycle前加一个touch down的程序,这样基本都可以跑出条带来。
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问
有人用trizol同时提取rna和蛋白过吗?按网上的步骤提取的蛋白质是不是很很难溶解?
天一湖医者
具体的提取步骤如下:1.样品加氯仿分层后,移去上层水相(该水相里就是RNA,可照常继续进行RNA的提取),加0.3ml乙醇沉淀中间层和有机相中的DNA,涡旋混合,室温放置3分钟,2-8℃不超过2000×g离心5分钟。【注:这一步同时可以除去未完全消化的残渣】2.小心吸出沉淀后的上清,加1.5ml异丙醇沉淀蛋白质。室温放置10分钟,2-8℃12000×g离心10分钟弃上清。3.加2ml含0.3M盐酸
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问
大家用超敏化学发光成像仪显影western blot时是怎么加显影液的?
whilt-shirt
显影液现用现配,均匀加在条带上,然后晃匀
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问
分别收集EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞,提取蛋白质,分别进行酶解,然后采用iTEAQ中的不同核素标记。
bamboopiggy
EGF刺激0分钟、5、10、30分钟的1841乳腺癌细胞中,不同时间点酪氨酸磷酸化位点的变化
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问
乳腺癌细胞中有一些小黑点,是黑胶虫吗?应该怎么办?
Summeryi
正常情况下,细胞也会产生一些小碎片呈现为黑色。还是要观察黑色的点点是否在运动,并且注意细胞的状态
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问
蛋白诱导时试了37 28 16℃ 都表达在沉淀形成包涵体了 16℃都没有还有再试温度(比如25 32℃)的必要吗?
未来9
诱导温度一般控制在15-25℃时能够减少蛋白包涵体形成,因此25℃以上应该可以形成包涵体。可以再改善温度以外的因素:比如诱导剂浓度等。
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问
his标签纯化目的蛋白跑胶呈现出拖尾的现象同一个胶其他样则不这样原因是什么呢?
bamboopiggy
感觉是你纯化蛋白上样浓度有点大,所以才出现了拖尾。
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问
成球实验培养的细胞球可以冻起来么
bamboopiggy
你最好把细胞球弄成单细胞悬液再冻起来,否则会损伤细胞球中间的细胞的。
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问
细胞没有污染,但经常有漂浮的细胞的原因
番茄炒蛋不加番哈哈
会不会是细胞的状态不好呢?如果是需要基质胶的,也可能基质胶不行吧,我不专门养细胞,有限的认知只能到这一步啦!
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问
细胞培养出现蜂窝状是什么原因
Eason老歌迷
是不是细胞老化呢?如果出现细胞老化,就会有增殖减弱,贴壁能力减弱 你可以用细胞衰老检测试剂盒染色,来判断一下
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问
细胞污染时都会有哪些现象
bamboopiggy
长的速度变慢,细胞出枝叉,液体容易变黄,液体中有小点点,液体中有絮状物
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问
[求助]肠神经元原代培养
天一湖医者
可以参考下这个文献https://xueshu.baidu.com/usercenter/paper/show?paperid=738210c5983acc2c5f8741f441763fcc
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问
求助,同时跑的胶,为什么会这样,分子量分别为36(内参)、28(AQP2)、65(NK-KB)
Summeryi
第一张背景过强,可以通过增加封闭时间或者洗膜的次数来改善。后面两张的蛋白有不同程度的降解,实验的样品尽量避免反复冻融,并且低温保存~
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问
收集鳟鱼胚胎提取物时,经过胚胎融化、过滤、离心厚,收集到的上清液,怎样稀释到理想蛋白质浓度?
我也是锦鲤ye
测量蛋白质浓度,用 LDF 将提取物稀释至理想的浓度。
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问
请问悬浮细胞如何做transwell测细胞迁移能力,具体步骤?按照正常贴壁的做过几次,上室种2万了细胞,染色没有细胞。
bamboopiggy
悬浮细胞穿过膜后会直接掉入下室,移除上室,用倒置显微镜观察可直接计数,在高倍镜下随机选取5个视野进行计数,最后计算平均值。或者收集下室培养液,用流式细胞仪计数
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问
使用胰蛋白酶加入EDTA是为什么?
dxy_nkqusvl2
EDTA是一种可以螯合Mg2+、Ca2+的螯合剂,细胞表面很多结合蛋白都带有这个Ca2+,因为Ca2+的作用细胞之间还有细胞与培养瓶之间才能连接,所以加入EDTA能有效率的将细胞从培养瓶上消化下来。
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问
细胞培养密度太低少会死吗?求助
Keven轩
会的,因为细胞在增殖分裂的过程中会旁分泌一些促生长因子,如果细胞密度过低,无法产生这些因子导致细胞增殖更新变慢,导致衰老凋亡
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问
请问下培养液第一次和第二次配的颜色不一样 还能用嘛?右边是第一次配的左边是第二次配的
异乡人hyq
应该可以用的,估计与高温灭菌产生少量碳化有关。
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问
提取的蛋白有少量沉淀那可以有什么办法补救一下吗?
Eason老歌迷
蛋白如果浓缩过快或者过度浓缩都有可能引起蛋白沉淀,建议蛋白浓缩后的最终浓度不要超过20mg/ml。如果已经出现沉淀,可以改进一下实验方法:1、离心力降低为原来的20-50%,2、改用截留分子量更大的超滤膜,3、在浓缩过程中取出超滤管,用枪头反复吹吸几次再继续浓缩,4、体积较大的样品可考虑选用超滤杯,减少沉淀的发生。据我所知,没啥补救
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