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Walker 256细胞可以连续传代多少次之后冻存
天一湖医者
原代分离的细胞最好在3代以内,如果是无限传代细胞无所谓。
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问
想问下中间细胞聚团的原因是什么
dxy_90k7dzq
状态不好、老化的细胞,也可能会出现抱团生长的情况(比如换液不及时、长的太满才传代、污染等造成的细胞状态差)。
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问
WB跑完用丽春红染色什么都没有?
喵喵喵柏
你在跑之前有没有定量测浓度呢?跑的时候看到了溴酚蓝的颜色不代表真的有蛋白
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问
细胞总是爱叠着长,之前不是这样的,请问是什么原因
bamboopiggy
这个感觉是你胰酶消化没有消化成单细胞,所以才逐渐扎堆生长
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问
细胞无明显污染但是总是飘很多
dxy_ybjer4q9
是不是培养基添加fbs和双抗的量不足导致的我们一般是培养基:fbs:双抗=50:5:1
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问
T3代细胞传代,生长9天细胞突然变黄,显微镜下镜检全都是死细胞,为什么细胞突然死亡?
bamboopiggy
考虑细胞数目是否太多?养的时间太长,导致细胞太拥挤,然后变黄一般就是细胞多了。在除外细胞污染的情况下。
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问
想用荧光显微镜观察病毒感染细胞后的形态,是用普通光学显微镜还是需要荧光显微镜
bamboopiggy
这个要看你的病毒带不带荧光,,如果带荧光,可以用荧光显微镜,顺便还可以看一下转染效率
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问
病毒以MOI为1接种细胞,是不是需要提前测TCID50后再计算病毒接种体积
bamboopiggy
MOI是multiplicity of infection的缩写,中文译为感染复数,一般认为MOI是一个比值,没有单位,其隐含的意思是 pfu number/cell,即病毒颗粒数/细胞数。如果你的pfu/ml值为undefined109(9次方),那么1毫升病毒液中有10的9次方 个病毒颗粒。如果你知道病毒滴度(pfu/ml)的值,那就简单些啦(因为病毒滴度(pfu/ml)的值得出是比较麻烦的),MOI=(p
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问
P62跑出来条带淡背景很脏怎么办,我用的是abcam的一抗,1:10000。大佬救救孩子吧
Eason老歌迷
背景脏不一定是因为仪器不干净造成的,也有可能是蛋白降解或者整个实验过程中条件不合适造成的。
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问
为什么用超滤膜包过滤出来的样品浑浊
天一湖医者
过滤后滤液仍然浑浊的原因1.滤纸破裂(1)玻璃棒下端紧靠在一层滤纸处,滤纸被戳破。(2)盛混合物的烧杯没有紧靠玻璃棒,滤纸被混合物冲破。2.混合物没有经过滤纸(1)液面高于滤纸边缘,混合物直接从滤纸和漏斗的间隙直接流下。(2)仪器不干净:漏斗下端不干净;下面收集滤液的烧杯不干净。
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问
如何高效的学习异种移植实验技术
bamboopiggy
从jove上找视频看,然后自己用废鼠动手做,多练几次。如果能找到会做的人,指点一下效率会更高
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问
组织细胞消化液的注意事项
天一湖医者
消化酶在-20度下,放一个星期左右是没什么问题的,时间再长了不太好。
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问
用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白有必要用Ni柱进行纯化吗?不纯化直接用来免疫可以吗?
天一湖医者
用于作为抗原对小鼠免疫的带His标签的目的蛋白是有必要用Ni柱进行纯化的。建议纯化后再用于ELISA.否则可能会产生很多非特异性的信号和比较高的背景.
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问
为什么用考马斯亮蓝法,空白值比样品吸光度值高
天一湖医者
出现这个情况可能是你的样品中的蛋白质含量确实很低,低过一定浓度时,结果就没有参考价值了。也有可能是考蓝工作液存放时间太久失效了,可以用一些蛋白标准品(比如BSA)来检验一下考蓝工作液是否正常。如果要用缓冲液做空白组的话,就用和蛋白样品一样的缓冲液就可以了
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问
细胞降脂模型不好建立,诱导分化不了成熟脂肪细胞,脂滴较小是什么原因
Eason老歌迷
诱导剂一定要选好,不能用甲醇固定,因为甲醇为脂溶剂,可以用4%多聚甲醛水溶液固定既可。而且吧染色之后不能脱水,甘油明胶封片。
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问
培养贴壁细胞,例如小肠上皮细胞用胰蛋白酶消化的时间,如何判断?
bamboopiggy
加入胰酶后,润湿一下细胞,然后吸出胰酶,不用吸的太干净。然后镜下观察,细胞变圆了,就可以终止胰酶消化了,容易消化的细胞大概30s-1min,不容易消化的,可以放37度数分钟,主要镜下观察形态改变
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问
在跑琼脂糖电泳时条带有拖尾,无法判断是纯合子还是杂合子,怎么避免这种情况?
bamboopiggy
感觉你提高一下琼脂糖胶的浓度,尽量拉开两条带,实在不行就加阳参吧。和阳参同一水平的,就是纯合子,否则杂合子
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问
细胞为何生长不均匀?
Keven轩
可能是在细胞放入培养箱之前没有进行八字摇匀,导致细胞在培养皿中分散不均
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问
如何计算细胞培养密度
Keven轩
可以取一定量含有细胞的重悬液进行梯度稀释后上C6流式器进行计数
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4189 围观
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问
WB一直跑不出条带咋办
doczp1
先测一下浓度是不是太低啦?还有就是没有表达出来蛋白
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