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问
将含有环状RNA序列的连接产物转化后挑选数个单克隆摇菌提质粒,双切鉴定有目的条带,这些阳性质粒之间会有差别吗?
迟C迟
阳性克隆只是含有抗生素那段序列,成不成环不能保证,还需要再在阳性克隆里面挑选你要的。
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问
wb实验bca定量做了之后内参依旧不齐怎么办😶
Eason老歌迷
BCA测定的是组织内总蛋白的量,但是由于组织内细胞类型比较复杂,所以所测定的某一特定蛋白的浓度并不准确,以所测浓度作为参考电泳,若结果内参不齐,可以根据各条带的灰度对上样量做适当调整,也就是调内参。若是细胞样品的话,BCA测定结果就比较准确了,跑出来基本上内参都是齐的。实在不行做标曲。
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问
pcr实验扩增曲线重复性不好怎么办呀~
迟C迟
1、引物特异性不好,扩增出多个目的条带会有波浪形扩增曲线。2、严重的蒸发会呈现先上升后下降的曲线,轻微的蒸发会是一种缓慢的上升,这些异常的曲线可以看一下检测后的反应管液面是否有下降的现象来证明。
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问
怎么判断感受态细胞是否好用,每次做转化都要两天才能长出来,是不是感受态的问题,质粒是18T载体,超级好连接的那种?
迟C迟
用酶切、PCR、测序 等方法验证长出来的菌落是否正确。可能是这一批感受态细胞活力不好,或者是培养箱温度不正常等等因素导致生长缓慢。
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问
慢病毒细胞稳转时间多久最好?
天一湖医者
慢病毒细胞稳转时间16-18小时最好
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问
构建质粒时,什么标签可以防止包涵体的形成?
bamboopiggy
重组基因在表达宿主中表达量过高或合成速度过快,以至于没有足够的时间进行折叠,二硫键不能正确配对,导致蛋白以包涵体的形式存在。所以你要调整你摇菌的速度和温度
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问
悬浮细胞怎么做激光共聚焦荧光显微镜?
bamboopiggy
可能你有荧光的细胞少,你可以考虑把细胞用促贴壁试剂贴到玻片上做。
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问
激光共聚焦的小皿,应该加多少培养基?铺多少细胞最合适?
bamboopiggy
你可以直接用玻底皿做,好像是35mm的,加2ml培养基
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问
细胞系发生改变还能看做原来的细胞系吗
bamboopiggy
别继续用了,可能你的细胞并不是你以为的那个细胞,最好再买一株,跟别人要的总是有风险
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问
慢病毒转染细胞后筛选抗性基因的细胞需要怎么判断?
bamboopiggy
一般需要筛两周左右没有死细胞了,就可以了
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问
慢病毒转染细胞的时间多长?
bamboopiggy
最少48小时,我一般感染72h,甚至更长时间,看细胞的密度
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问
慢病毒转染细胞过程浓度多少?
秋秋欣欣
刚开始可以用96孔板或者24孔板做个浓度低度,设置不同MOI值的感染组,通常设立1,2,5,10,20,50,100的感染组别
3 回答
568 围观
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问
细菌WB实验的注意事项
bamboopiggy
我当时是做蛋白纯化裂的菌,可以直接用裂细胞的lysis裂就可以,但是内参,我没有做过,你要不做个蛋白定量试试
5 回答
1989 围观
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问
沙眼衣原体感染细胞的实验需要在什么等级的实验室进行啊?
天一湖医者
沙眼衣原体感染细胞的实验需要在二级的实验室进行。
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问
RNA体外转录buffer
天一湖医者
其配方为400 mM Tris-HCl(25℃,pH 8.0),200 mM MgCl2,25 mM TCEP,20 mM spermidine。
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问
求助:流式单标峰形奇怪
天一湖医者
有可能是本身就是很多峰构成的,但由于制备液相上所连接的制备柱的规格或者进样的浓度大等因素导致峰与峰之间分离度降低,进而形成了一个单峰,而制备出来,再经分析液相检测时,原来单峰中所包含的那些峰就显现出来了;或者是在制备后回收的过程中,受热或者光照等因素的影响,导致化合物变性或者降解,也会出现这种情况。如果是前者,那么可以降低样品浓度或者调整流动相的比例,使峰得到很好的分离,也可以试试不同填料的色谱柱
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问
请问大家有做过原生质体实验的大佬呀
迟C迟
我们实验室常做水稻和大麦原生质体,欢迎来问具体实验细节。
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问
PCR实验中,我的目的条带有出来,但是野生型的条带却未出来,这是为什么?
迟C迟
首先要确定野生型和你的样本之间目的基因的差异,是不是你的样本目的基因存在特异性,野生型就无法扩增出特异的目的基因。
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336 围观
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问
流式分析细胞凋亡实验中如果消化贴壁细胞前用PBS清洗,那不是把凋亡细胞都洗掉了吗
我不是药神88
流式处理细胞的时候,pbs要轻柔冲洗细胞1次,目的是为了去掉培养液(含血清的),以防止血清终止胰脢的消化;这之前倾倒培养液之后,用pbs处理1次细胞,并不会对起产生特别大影响,注意不要用枪头直接吹打细胞,这样基本上不会影响实验结果。过度吹打细胞会造成细胞机械性死亡。
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问
混菌定量
迟C迟
可以,找到23srRNA序列,按照qPCR引物设计原则:1. 引物长度:18-25bp;2. GC含量:30%-80%,最好是40%-60%;3. 引物Tm值最好在60℃左右,上下游两条引物Tm差异不要超过4℃;4. 避免引物与目的基因之间发生错配,特别是引物3端,不要超过6个碱基;5. 避免特定碱基的连续重复,特别是引物3端出现3个或以上连续的C或者G重复;6. 避免引物自身形成发夹结构;7.
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