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问
谷氨酸棒杆菌电转,每个电击杯加多少质粒和菌液呢?
府宅
转化时一般200ul感受态细胞悬液 中加入的质粒含量不超过50ng,体积不超过10ul。将40~100ul解冻的感受态细胞转移电击杯
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问
外泌体研究
dxy_gwrp7ndq
可使用洗涤剂处理和超声波替代电穿孔方式
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问
关于Naive CD4+T的活化增殖
天一湖医者
CD3不超过50ng/ml,CD28不超过30ng/ml。
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问
拥挤棒状杆菌感染抗生素如何选择?
dxy_gwrp7ndq
应根据药敏实验选择相应抗生素控制感染
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问
Pcrtargeting切除抗生素是电转进Bt340后在37度完成筛选吗?然后在42度过夜诱导吗
府宅
37度培养筛选,42度热击90秒
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问
胶体金释放不完全问题
天一湖医者
可能是因为你的胶体金的颗粒大小的选择和最佳抗体标记量的选择上出了问题,这是多方面的因素导致的,你得先固定一个影响因子来调另一个因子,这样反复实验看看效果。
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问
求助hepG2炎症模型建立
汤姆卜丽波
做过诱导巨噬细胞的,有很多文章都涉及到LPS刺激或者影响hepG2炎症因子分泌的,你可以看看参考一下
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问
广集讨论
秋秋欣欣
QRICH1是UPR中PERK-eIF2a通路的关键效应因子,是细胞进入内质网应激终末端的主要决定因素。
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问
植物CP蛋白的单抗感觉特异性不是很强,能跑出来很多带,请问这是正常现象吗,如何解决?
dxy_gwrp7ndq
如果实在没有更好的抗体,建议采用阴性对照和阳性对照来确定上述哪个条带是目的条带。
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问
如何提高circRNA的成环效率
天一湖医者
由于circRNA本身就能环化,所以将circRNA两侧的内含子序列充当环化臂进行构建;另外,也可以取一侧内含子序列1kb,另一 侧构建互补序列充当环化臂,最后检测circRNA的过表达效率,取最佳构建方式。
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问
各位老师,请问动物实验生化指标中的SOD和MDA的数据是不应该反着来,会不会有这两个指标同时升高或同时降低的情况
dxy_gwrp7ndq
SOD 和MDA,一个是清除超氧自由基的酶,一个是指膜过氧化程度。保护指标和损伤指标不会同高或同低
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问
实时定量PCR进行比较时,需要进行统计吗?如何进行统计学分析?
秋秋欣欣
需要进行统计分析的,计算样本的平均±SD,CV
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问
ELISA实验结果出现不在线性范围,高可以稀释样品,低的要怎么弄呢?对比OD值,结果能认吗?
汤姆卜丽波
可以搞个再灵敏一点的试剂盒测试一下
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问
纳米材料加入真菌培养基后易被析出。
天一湖医者
纳米抗菌材料与真菌接触后会诱导其细胞产生氧化应激反应,从而使真菌的细胞结构和脂质、蛋白质和DNA等成分被氧化破坏。有些情况下纳米抗菌材料也会使真菌细胞内部产生超氧阴离子自由基、羟基自由基、过氧化氢和单线态分子氧等活性氧物种,这些物质的过度累积会造成细胞的凋亡。
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问
培养真菌所用PDA培养基调整ph值后很难凝固,求助
天一湖医者
降低pH值造成培养基酸解,因此不易凝固
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问
抽提完的质粒,有什么办法去内毒素吗?
天一湖医者
使用过滤中性的细菌裂解液,并加入专门的不含内毒素缓冲液(缓冲液ER)在冰上进行共同孵育。不含内毒素缓冲液能够避免LPS分子与树脂结合,从而使每微克质粒DNA中含有的内毒素少于0.1EU。
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问
怎么用qpcr来检测病毒的滴度呢,样品是293t细胞产生的病毒,需要怎么处理吗?
汤姆卜丽波
通过在载体的长末端重复序列区(LTR)设计定量引物,利用荧光实时定量PCR测定重组慢病毒中LTR拷贝数来测定病毒颗粒数和有效感染的病毒颗粒,通过慢病毒颗粒数与实际有活力病毒滴度的比较,可以计算得到重组慢病毒感染效率.
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问
关于瞬转,目前质粒已经构建好,但是使用转染试剂性价比不高,请问有推荐的吗?
Omiget12
建议可以用慢病毒包装,我们经常做还是可以的。转染向Lipo这些价格太高了,没有必要,可以用些性价比比较高的就行。可以查一下Omifection这款产品。
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问
外泌体纯化超速离心,亲和纯化,微流控,粒径排阻色谱
Omiget12
本人用过一款试剂盒,方法简单,提的外泌体也比较纯
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问
ELISA可以检测外泌体吗?不用来源的样本前期处理对实验结果有很大影响吗?
Omiget12
基本很少用这种方法检测外泌体。大多用的是WB检测外泌体蛋白,NTA检测外泌体颗粒数和大小,电镜观看外泌体形态。这三种是最常用的
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