实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问请问，我提出来的RNA浓度很低只有18ng/ul，od值也是1.7几，是不是提出来的是蛋白质，不是RNA，有谁出现这种情况吗？

bamboopiggy

你看你读的od值是什么数值的？260/230还是260/280？

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问小鼠脑部小胶质细胞免疫荧光

bamboopiggy

我看着你这个图可以，你可以参考一下人家文献里的图片，或者是你选的位置改改

3 回答1611 围观

问为什么转化涂板后第二天菌落长的特别多，老师说是不对的？

bamboopiggy

你是质粒转化，还是连接产物转化？如果是质粒，是可以的，如果是连接产物，那一般是假的

3 回答1903 围观

问分选出来的肿瘤干细胞表面标志物阳性要达到多少，才能进行下一步实验。我是双阳性选用CD133和CD44

秋秋欣欣

一般至少是要达到60-70左右

3 回答519 围观

问想问一下，在wb时，配制5%的脱脂奶粉，有的用pbst稀释有的人用tbst稀释，两个缓冲液有什么区别吗？

bamboopiggy

都是缓冲液，问题不大，我喜欢用pbst，因为不需要调ph值，tbst是需要调ph值得，但是有人说tbst对磷酸化得蛋白好。

3 回答5126 围观

问请问pcrtargeting的bt340是什么的原理

汤姆卜丽波

BT340是一种温敏型质粒，在42℃高温诱导下质粒 BT340 可以表达 FLP 重组酶,FLP 重组酶可以识别质粒中安普抗性框两侧的 FRT 序列,将 FRT 之间的抗性基因敲除,在此过程中质粒 BT340 消失,之后原基因插入抗性基因的部分仅剩下 81bp 的 scar 序列 FRT 序列经 FLP酶切除后剩余的部分序列),所得即为原基因内部被敲除的重组质粒。

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问基因测序结果有两个碱基突变，还可以用吗

府宅

如果是表达的话，只要氨基酸序列没有改变，接下来的实验还是可以继续的，如果在其他区域，如果此位点不是你的核心区域，个人认为影响不大。

4 回答1326 围观

问wb实验，上下槽缓冲液有何要求，怎样才能达到最佳效果？

balalaLy

上槽（内槽）缓冲液要加满，至少要没过玻璃短板多一点点，不然影响整个电泳体系的电流，造成电压不稳，条带跑不好

3 回答287 围观

问wb目的蛋白分子量跨度很大？

bamboopiggy

用10%-12.5%的胶，以小分子量的那个marker没有跑出去为止，转膜300mmA，2个小时足够

3 回答509 围观

问流式做完，细胞染色后可以固定吗？

汤姆卜丽波

你想问的是不是流式过程中的固定，一般检测胞内因子，会染色后固定一下。既可以延长它的保存也可以固定位点防止降解。可以固定

4 回答630 围观

问wb实验的转膜液除了加甲醇的这个配方，还可以用什么配方?感觉每次用完眼睛都疼

Guoood

可试用快速转膜液或使用半干转，有些是不需要甲醇的。但如果使用PVDF膜是必须用甲醇激活的。

3 回答1241 围观

问肿瘤组织提蛋白跑WB不齐

balalaLy

组织取出来后称重，每个组取等质量的组织

5 回答1233 围观

问小鼠造模打完肿瘤细胞后量瘤子忽大忽小，什么原因？

汤姆卜丽波

可能是种的时候引发了炎症，一直在炎症反应，不断的反复吸收

4 回答952 围观

问input有带，但是ip部分互作的部分没有带

balalaLy

如果确定蛋白有互作的话可能是提蛋白的过程出了问题，比如所用的裂解液太强了，影响了两个蛋白的结合导致拉一种蛋白的时候另一个没有一起拉下来

4 回答327 围观

问lncRNA使用shRNA敲低后使用什么方法回补效果比较好？

秋秋欣欣

pcDNA过表达就行，普通的也不会有影响

2 回答641 围观

问质粒转染中，在不对细胞活率影响下，平均单个细胞能承受多少拷贝质粒，或多少质量的质粒？

汤姆卜丽波

一般单个细胞根据质粒的大小来看，转染效率比较好的话可以接受2-3个，差不多的话基本一对一

2 回答574 围观

问请问想做三个细胞共培养要如何选择培养条件？

府宅

如果有文献参考的话就比较容易开展实验，然后根据实际情况稍作调整，比如共培养的比例、共培养的时间、检测的时间等；如果没有任何参考，就自己多设置几个预实验条件进行摸索，确定个大致的条件。

3 回答464 围观

问请教Proteome profiler array是什么分析

汤姆卜丽波

Proteome Profiler即血管生成蛋白芯片抗体，芯片为同时检测单个样品中多个分析物的相对水平提供了一种快速、灵敏而又经济的工具。这种芯片的使用不需要特殊的仪器，也不需要进行多个免疫沉淀或者Western blot实验。每个芯片在设计时都采用精心挑选的捕获抗体，并在硝酸纤维素膜上重复点样两次。这些膜与实验样品以及包含生物素化检测抗体混合物共同孵育，随后加入辣根过氧化物酶(HRP)偶联的链亲

3 回答1203 围观

问难道这才是隐窝？

秋秋欣欣

你这看着不太像隐窝结构哦，隐窝结构有点像星状的

4 回答382 围观

问WB条带跑不出来

Eason老歌迷

嗯，wb就是一个连续的步骤繁多的实验，它其实不难，但是如果其中一个步骤出错，就会显影不佳，得不到你想要的好结果。首先你先回忆一下，你的实验过程，你提蛋白怎么提的，……然后你不行就换一个蛋白是不是实验效果，如果还跑不出来，就可能是你的实验设计问题。

4 回答814 围观

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