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问
SDS-PAGE出现异常条带,比如微笑现象,拖尾现象,文理现象,条带粗等是什么原因?怎样可以避免?
府宅
纹理现象:可能是由于样本中不溶性颗粒引起的。建议:加样前离心;加适量样品促溶剂。拖尾现象:主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。
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问
建立基因调控网络时的小问题
dxy_btpk2zd7
建议还是先看看GEO和基因表达的科普文章。GEO里的就是基因表达数据,有原始数据,有预处理过的。一般你最后拿到的应该是一个矩阵,行代表基因(通常会有2到5万),列是样本。你就从这个矩阵里挑基因出来,学习BN即可。当然,如何挑基因还是个很tricky的问题,也有很多方法。 关于重构基因调控网络,方法已经有很多。选取何种方法,关键取决于你想通过网络得到何种信息。BN十多年前就已经有所应用,听起来很fa
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问
结肠He染色切片怎么看?怎么进行评分?
dxy_gwrp7ndq
组织切片HE染色评分表如图所见。
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问
荧光素酶报告基因检测仪器
bamboopiggy
没法用荧光分光光度仪,只能用化学发光仪或者多功能酶标仪。如果实验室没有,去问问隔壁实验室或者你们学校的实验平台有没有。
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问
寻找某基因-170到90序列时第一bp是CDS区起始密码atg中的A么?
bamboopiggy
启动子(promoter):与RNA聚合酶结合并能起始mRNA合成的序列。转录起始点(TSS):转录时,mRNA链第一个核苷酸相对应DNA链上的碱基,通常为一个嘌呤。
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问
同种肿瘤不同细胞系之间比较某个lncRNA表达水平的话,该用什么内参
秋秋欣欣
我们组都是用的GAPDH ,结果也比较稳定
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问
茎环结构miRNA逆转录,是混合逆转录好,还是单管逆转录好?
哇哈哈哈321
做miRNA荧光定量,应该是单管逆转录好。
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问
想做双酶切,出来的条带很浅,请问质粒浓度达到多少酶切的效果比较好?
天一湖医者
质粒浓度一般以μg/ml来计算,一般双酶切使用质粒的量为20μl使用1μg左右质粒。
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问
如何检测细胞内的NADH
bamboopiggy
有专门的检测试剂盒,国产的都有。
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问
WB结果中可能出现有目标蛋白条带,但是目标条带在膜上颜色较浅,请问这是什么原因呀?
天一湖医者
转膜不充分 规范转膜的操作;优化电转条件;可将两张膜叠加在一起,防止转膜过度,或使用小孔径膜洗膜过度 洗膜时间不宜过长,加入的去垢剂不宜过强或过多,减少洗膜次数,洗膜时间和温度封闭过度 减少封闭时间,试用不同的封闭液曝光时间过短 延长曝光时间,如使用化学发光成像系统,可调整显示灰度值抗体染色不充分 延长孵育时间或增加抗体浓度抗体问题 抗体浓度低 增加抗体浓度抗体和抗原亲和力不足 增加抗体浓度抗体活
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问
Western Blot还需要剪膜么?
一只软妹
可以剪,不剪的话容易有其他非特异性结合,容易脏
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问
大家好,我是新手,最近做的WB结果,请大家点评谢谢谢谢!
bamboopiggy
你gapdh太强了,和你的目的条带分开显影,不要一起显,应该都会出来的。
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问
请教各位,内参不齐,怎么判断是转膜夹的问题还是上样量的问题呢
宁儿小贤
如果测过bca,调整过样品浓度的话就一般不是上样量的问题,看你的图不太像转膜夹的问题。
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问
请问显影膜上有黑点是什么原因?
宁儿小贤
膜上的黑点就是脏东西,膜很容易吸附其他物质,每次洗的时候时间长一点,多洗几次,镊子夹在同一个地方,尽量不要碰别的地方
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问
FLG跑WB一直跑不出来……
天一湖医者
可能原因:1、孵一抗的方法;2、抗体;3、曝光时间;4、转膜;5、手法不稳定;6、其他你根本没察觉到但对结果影响大的小毛病。
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问
养细胞求助
dxy_gwrp7ndq
很可能是黑胶虫,这也没什么特别好的方法。
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问
细胞传代离心不下来
bamboopiggy
不是离心机的问题,感觉是你们细胞消化过了的样子,要不你镜下看看消化程度,然后收细胞。
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问
针头过滤器求助
bamboopiggy
那种老式的滤器,需要自己组装的,但是现在大家基本都用一次性的了,自己组装的,弄不好会漏,还要自己高压灭菌比较麻烦,你可以问问一些中国的小的耗材公司可能会有。
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问
蛋白纯化有活性无条带
bamboopiggy
你的酶活性太高了,可能蛋白浓度还不够wb检测的,那点点蛋白的酶活性就够了。
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问
求助:如何获取Cochrane的试验数据
秋秋欣欣
搜索一下这个CBMdisc cochrane
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