实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问将含有环状RNA序列的连接产物转化后挑选数个单克隆摇菌提质粒，双切鉴定有目的条带，这些阳性质粒之间会有差别吗？

迟C迟

阳性克隆只是含有抗生素那段序列，成不成环不能保证，还需要再在阳性克隆里面挑选你要的。

1 回答309 围观

问请问在做植物细胞悬浮培养时（百合），如果要将愈伤组织分散，所用的酶有哪些，对应的用量是多少呀？浓度和用量之类的。

迟C迟

用果胶酶和纤维素酶。称取25mg蛋白酶粉配制成25ml酶溶液，每次用100-200微升就可以。

1 回答698 围观

问wb实验bca定量做了之后内参依旧不齐怎么办😶

Eason老歌迷

BCA测定的是组织内总蛋白的量，但是由于组织内细胞类型比较复杂，所以所测定的某一特定蛋白的浓度并不准确，以所测浓度作为参考电泳，若结果内参不齐，可以根据各条带的灰度对上样量做适当调整，也就是调内参。若是细胞样品的话，BCA测定结果就比较准确了，跑出来基本上内参都是齐的。实在不行做标曲。

9 回答4169 围观

问做完转录组学后，必须要做q-pcT昨做验证吗

迟C迟

看文献吧，一般需要再次用qPCR验证一下公司做的转录组数据准不准确的。

4 回答2253 围观

问pcr实验扩增曲线重复性不好怎么办呀～

迟C迟

1、引物特异性不好，扩增出多个目的条带会有波浪形扩增曲线。2、严重的蒸发会呈现先上升后下降的曲线，轻微的蒸发会是一种缓慢的上升，这些异常的曲线可以看一下检测后的反应管液面是否有下降的现象来证明。

4 回答576 围观

问怎么判断感受态细胞是否好用，每次做转化都要两天才能长出来，是不是感受态的问题，质粒是18T载体，超级好连接的那种？

迟C迟

用酶切、PCR、测序等方法验证长出来的菌落是否正确。可能是这一批感受态细胞活力不好，或者是培养箱温度不正常等等因素导致生长缓慢。

3 回答726 围观

问慢病毒细胞稳转时间多久最好？

天一湖医者

慢病毒细胞稳转时间16-18小时最好

3 回答511 围观

问构建质粒时，什么标签可以防止包涵体的形成？

bamboopiggy

重组基因在表达宿主中表达量过高或合成速度过快，以至于没有足够的时间进行折叠，二硫键不能正确配对，导致蛋白以包涵体的形式存在。所以你要调整你摇菌的速度和温度

2 回答432 围观

问用大肠杆菌纯化蛋白时出现包涵体怎么办？

迟C迟

可以用尿素(8M-10M):尿素溶解不电离,呈中性,成本低,蛋白复性后除去不会造成大量蛋白沉淀;溶解后的包涵体可选用多种色谱方法纯化。或者用盐酸胍(6M-8M):溶解能力强,高达95%以上的溶解作用。

3 回答409 围观

问WB实验内参不齐，怎么校准？

宁儿小贤

提完蛋白之后做一下BCA蛋白定量，将总蛋白调整到同一量级，例如都是七八百，或者都是一点几，一般上样之后就没问题了

10 回答7562 围观

问悬浮细胞怎么做激光共聚焦荧光显微镜？

bamboopiggy

可能你有荧光的细胞少，你可以考虑把细胞用促贴壁试剂贴到玻片上做。

3 回答5416 围观

问激光共聚焦的小皿，应该加多少培养基？铺多少细胞最合适？

bamboopiggy

你可以直接用玻底皿做，好像是35mm的，加2ml培养基

4 回答19153 围观

问细胞系发生改变还能看做原来的细胞系吗

bamboopiggy

别继续用了，可能你的细胞并不是你以为的那个细胞，最好再买一株，跟别人要的总是有风险

3 回答370 围观

问慢病毒转染细胞后筛选抗性基因的细胞需要怎么判断？

bamboopiggy

一般需要筛两周左右没有死细胞了，就可以了

3 回答489 围观

问慢病毒转染细胞的时间多长？

bamboopiggy

最少48小时，我一般感染72h，甚至更长时间，看细胞的密度

3 回答4994 围观

问慢病毒转染细胞过程浓度多少？

秋秋欣欣

刚开始可以用96孔板或者24孔板做个浓度低度，设置不同MOI值的感染组，通常设立1，2，5，10，20，50，100的感染组别

3 回答507 围观

问沙眼衣原体感染细胞的实验需要在什么等级的实验室进行啊？

天一湖医者

沙眼衣原体感染细胞的实验需要在二级的实验室进行。

2 回答478 围观

问请问大家有做过原生质体实验的大佬呀

迟C迟

我们实验室常做水稻和大麦原生质体，欢迎来问具体实验细节。

1 回答560 围观

问PCR实验中，我的目的条带有出来，但是野生型的条带却未出来，这是为什么？

迟C迟

首先要确定野生型和你的样本之间目的基因的差异，是不是你的样本目的基因存在特异性，野生型就无法扩增出特异的目的基因。

3 回答280 围观

问流式分析细胞凋亡实验中如果消化贴壁细胞前用PBS清洗，那不是把凋亡细胞都洗掉了吗

我不是药神88

流式处理细胞的时候，pbs要轻柔冲洗细胞1次，目的是为了去掉培养液（含血清的），以防止血清终止胰脢的消化；这之前倾倒培养液之后，用pbs处理1次细胞，并不会对起产生特别大影响，注意不要用枪头直接吹打细胞，这样基本上不会影响实验结果。过度吹打细胞会造成细胞机械性死亡。

3 回答669 围观

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