实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问外泌体提取？提外泌体怎样才算的好？想请教大家一下。

府宅

WB检测可以发现样品中具有外泌体的标志物，可以一定程度上排除溶酶体、蛋白聚团、支原体等情。NTA粒径分析可以反应外泌体样品中粒子的群体特征，了解其纯度

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问求教，大片段目的基因（6700bp）如何获取？

府宅

可以根据数据库选择表达量高的部位进行模板制备，这样的话，也比较容易扩增出来；可以分成两三段就可以了，选择合适的酶切位点；再次，选择高保真的聚合酶，这样扩增出来不容易出现突变，可以适当提高循环数，增大产量，可以设置梯度PCR，寻找最优的条件。

3 回答500 围观

问求助，WB背景黑，条带淡怎么解决

Eason老歌迷

现在都夏天了，你减少二抗孵育时间看看。我之前也遇到过这种情况。

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问使用鸡毒支原体作为病原菌，细胞细菌污染。

bamboopiggy

你用支原体清除剂，或者是：阿奇霉素、强力霉素，或有时左氧氟沙星或莫西沙星，试试，青链霉素对没有细胞壁的细菌没有作用的

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问脑立体定位注射如何确定深度

府宅

在翻到该核团所在的页面，多是冠状切面，核团的长度要看所占的页数（右下角有一个Bregma值，用第一页的这个数值减去最后一页的这个数值就是核团的长度）。根据这些数据估算核团的长度。核团的宽度、高度可直接由图上的坐标读出，即在各页面上挑选一个横截面最大的，在核团中心点一点，经这个点划水平线和垂直线，水平线和纵坐标的交点就是核团的深度坐标（颅骨下多少mm），垂直线和横坐标的交点就是核团左右坐标（中线旁开

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问求做western和IP裂解蛋白的注意事项(小分子蛋白10kd左右)，因为一直IP不下来，input有时候也无条带……

Eason老歌迷

裂解蛋白，一定要在冰上进行，因为有的蛋白很容易降解，尤其是现在天气热，你搁常温一会就降解了

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问怎么计算荧光共定位效率？？？

天一湖医者

在ImageJ菜单下Analyze，Plot Profile（快捷键Ctrl+K）可以找到Plot Profile工具。Plot Profile只适用于线（Line）和矩形（Rectangluar）选框，表示线段和矩形选框所经过的范围内的灰度变化：对于仅含有红绿蓝三通道RGB格式荧光图片，可在ImageJ菜单下Image，Color，Split Channels，得到Red，Green，Blue

2 回答515 围观

问细胞来源，如何才能确定？各位前辈：本人预涉及胃癌细胞实验，手里有几株细胞，可不知细胞具体来源，不知如何查询？

bamboopiggy

MKN45 established from the poorly differentiated adenocarcinoma of the stomach (medullary type) of a 62-year-old woman MKN-1 (mutant P53)：Gastric adenosquamous carcinoma ，Derived from metastatic site:

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问细胞转染后出现了很多小点点，是凋亡吗?

bamboopiggy

出现的黑点可能是细胞碎片，可以在收样的时候，用pbs洗掉

5 回答390 围观

问寻找多个序列的直系同源序列，如何精准查确？

Eason老歌迷

同源序列的查找，顾名思义就是我们要找的是和这个序列相似的序列，比如拟南芥，我们找到这个植物的一个序列，那就是把一个数据库当作比对的参照物，把这个一个拟南芥的序列与这个数据库进行比较，查看那些物种的序列和这个序列相似，这个是线上的方法，我们直接利用ncbi中的官网的方法比较blast。

4 回答1158 围观

问关于TGF-BETA/SMAD通路的相关问题？

府宅

可使用加减三甲散及其虫药可使SMAD表达降低

3 回答316 围观

问STR引物设计如何开始呢？

天一湖医者

引物以18～30bp为宜；引物中C+G含量宜在50%左右；引物内部和引物之间不应含有互补序列；引物的碱基顺序与非扩增区域的同源性应小于70%；引物的3’末端与模板DNA一定要配对，但末端没有严格的限制，故引物设计时可在5’末端加上限制性内切酶位点和/或启动密码ATG等；引物合成后必须纯化以去除合成产物中的不完整序列、脱嘌呤产物、碱基修饰链等“杂质”；引物的终浓度一般为0.2～0.5μmol/L，过

2 回答1552 围观

问蛋白分子量62-21kd，忽然发现一直用的PVDF膜是0.22μm的，对结果有影响吗？

秋秋欣欣

出现哑铃状的结果图最可能是你胶的问题，0.22的膜转62的蛋白完全没有问题

4 回答1791 围观

问目的基因ct和外参ct

天一湖医者

可以用，不同基因之间表达量差异很大，可达上千甚至上万倍之差，所以CT值差10以内属正常现象。

2 回答408 围观

问重组腺病毒抗原表达鉴定

秋秋欣欣

是不是病毒量不够，没有转染成功啊

3 回答335 围观

问biolegend的Fixation Buffer可否用于表面染色后的细胞保存？

bamboopiggy

paraformaldehyde 是多聚甲醛，如果你的biolegend的fixation buffer成分也是多聚甲醛，可以用的

4 回答461 围观

问ImageJ连续处理图片，每张图都需要Calibrate吗？

bamboopiggy

需要啊，因为每张图的底色可能都不一样

4 回答392 围观

问请问各位大佬知道为什么我的PMB单独加到培养液里RAW细胞没有反应，但是跟我的一个蛋白混合后加就会引起细胞的炎性反应吗？

天一湖医者

有可能是血清浓度问题，或者是培养液有问题。，

1 回答485 围观

问想知道同源重组对于链霉菌有什么特殊需要注意的吗

府宅

用硫链丝菌素抗性基因作为筛选标记，可以简单直接地获得可能发生同源重组的菌株，以便进一步从分子水平上用杂交进行验证

1 回答381 围观

问求助PCR条带问题？

dxy_2cic6tye

用的多大浓度的胶？目的片段大的话，胶浓度应该低。另对照样本跑的怎么样？marker图谱是否正常

7 回答305 围观

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