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        EL4小鼠淋巴瘤细胞培养

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        zealni

        请问EL4小鼠淋巴瘤细胞培养方法及注意事项,之前没有养过。

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        3 个回答

        user-title

        汤姆卜丽波

        有帮助

        它是个悬浮细胞,所以要注意离心沉降,10%血清,一传二传代。

        user-title

        府宅

        有帮助

        注意事项:为了减少细胞损失,往细胞冻存管中加入1mL完全培养基,稍微吹打,用吸管/移液器将这1mL的细胞悬液吸入离心管中,再用吸管/移液器将离心管中的细胞轻轻吹打混匀。

        user-title

        dxy_gwrp7ndq

        有帮助

        培养步骤:

        1)复苏细胞:将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜(或将细胞悬液加入6cm皿中),培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。

        2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

        1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

        2. 加1-2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培养瓶中,置于37℃培养箱中消化1-2min,然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。

        3.轻轻吹打细胞,完全脱落后吸出,在1000RPM条件下离心8-10分钟,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。

        4. 按5-6ml/瓶补加培养液,将细胞悬液按1:2到1:5的比例分到新的含5-6 ml培养液的新皿中或者瓶中。

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