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问
为什么我跑内参总是出现两个上下相同且平行的条带?
whilt-shirt
这是出现了杂带,有可能是抗体浓度过高,建议增加内参一抗的稀释比例
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问
关于突变信号肽序列研究的相关问题
Eason老歌迷
肯定是不能的。信号肽位于分泌蛋白的N端。一般由15~30个氨基酸组成。包括三个区:一个带正电的N末端,称为碱性氨基末端。一个中间疏水序列.以中性氨基酸为主,能够形成一段d螺旋结构,它是信号肽的主要功能区。一个较长的带负电荷的C末端,含小分子氨基酸,是信号序列切割位点.也称加工区。一般使用定点突变。
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问
WB显影时内参蛋白有条带,但是目标蛋白没有,显示信号弱出不来条带,有什么解决的办法吗?之前显出来过一次,还是同样的条件就不行了
whilt-shirt
增加目的蛋白一抗浓度或者换用1.5mm的胶增加上样量试试
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问
为什么移液枪枪头里总是残留一点液体?
Eason老歌迷
你操作的时候不要太快。吸液、出液操作都要缓慢,这样就不会有残留了。或者是也有可能是你的枪头质量有问题。
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问
超滤后废液有目的蛋白
Eason老歌迷
要是没有特别的破损,你可以试一试清洗下。随着超滤过程的进行,在膜表面逐渐形成凝胶层,使透过通量下降,当通量达到某一最低数值时,就需要进行冲洗,这段时间成为运行周期。运行周期的变化与清洗情况有关。可以使用 0.1-0.5 M NAOH清洗。
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问
wb背景比较杂
Eason老歌迷
你这背景有点埋汰,脏,有小黑点。可能是封闭液的问题,封闭液是不是有小沉淀。是不是你洗膜没洗干净。
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问
image j 与 image lab
Eason老歌迷
image lab是官方版,需要你自己去找一些小插件。而image j功能更多,然后它自带了很多小插件,不用你自己去网上下载。我个人更喜欢用image j,然后教程你可以去网上自己搜一下。
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问
WB显影
balalaLy
wb是一门玄学,做得越多越能碰上各种奇奇怪怪的情况。有些情况你也解释不清楚,重复做就是了,实在不行换个抗体,还不行,咱换人做。
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Southern Blot
天一湖医者
Southern杂交实验中,基因组酶切后跑电泳用的胶需为9.8cm×8.0cm 大小
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紧急求助
天一湖医者
基因和自杀质粒连接不上,一般是因为限制酶的识别位点大多是反向对称的,如果只用用同种酶切,所得片段的2端序列相同,在连接时,是随机连接,不仅会出现反向连接,而且会出现片段串联。
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问
原虫污染怎么办
Eason老歌迷
要么你就丢弃这些细胞和培养基,重新弄。要么你可以试一试用甲醛熏蒸。
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问
请问培养基里这层网状物是啥
超级无敌小仙女呀
从图片来看有些像细胞长时间没有传代造成的细胞老化,或许使用PBS清洗一下传代一下看是否还有。
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细胞技术与形态学板块
balalaLy
伊红很容易染,也很便宜,很可能是你用的伊红有问题,直接换吧
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orbit image analysis
Eason老歌迷
这个软件挺简单的,就是动态观察图像分析。我记得我当时学的时候就是查的一篇文献,那篇找不到了,你可以看看这篇新的:Orbit Image Analysis: An open-source whole slide image analysis tool
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问
小鼠皮肤石蜡切片制作,切片组织会碎什么原因
天一湖医者
那是因为内应力被彻底破坏导致 !
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问
求助!脑组织MDA检测经验
balalaLy
有可能是细胞破碎不好,或者组织量不够。有时候也可能大胆质疑一下试剂本身……
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问
FGF21配置
明明ov
谢谢回答,可是FGF21摩尔质量20800,我想着配成100uM稀释,但是只能配到12ul,还不够一次使用
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问
购买的原代细胞想自己鉴定,鉴定的时间是什么时候?复苏后吗?
balalaLy
起码得传个几瓶保种,不然鉴定完都没有细胞了不是白做了嘛
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问
各位老师,想请教一下病理组织切片脱水与浸蜡步骤的各溶剂时间怎样安排效果会好一些
Eason老歌迷
常用的脱水剂是乙醇,因为它价格便宜,易于得到。为了避免剧烈的扩散引起的组织的强烈收缩,脱水步骤应从低到高以一定的浓度梯度来进行,一般组织从50%乙醇开始,经过75%、80%、90%、95%、100%至完全脱水。脱水时间依据组织的类型和大小而定,一般各级乙醇中放置1到2h不等,如果中间须停顿,大部分材料停留在75%乙醇中,因为低浓度乙醇易使组织变软、解体,高浓度乙醇有脆化组织作用,放置时间不能过长。
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问
如何选择Rho的激动剂?
Eason老歌迷
我们实验室用nf—kb比较多,其实也都差不多。然后你可以根据自己想要做的实验,自由的选择,或者你可以去PubMed上找相关文献,然后查找一下它的方法,里面都有详细介绍。
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