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问
请教一下各位质粒小提的注意事项
balalaLy
最终洗脱的时候可以把洗脱液加热到50度左右,可以明显提高质粒洗脱效率
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问
流式细胞数计骨髓造血干细胞数?
天一湖医者
一般的细胞-80保存2-3个月,但最好不要超过2个月。
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问
犊牛小肠上皮细胞提取后不贴壁,但是感觉培养瓶中细胞增多,怎么办
天一湖医者
细胞不贴壁的一些原因 1. 胰酶消化时间把控不当:消化不够细胞本身就是成团的;若胰酶处理太久,容易造成细胞膜蛋白损伤,使细胞贴壁不紧,显微镜下观察立体感不强,严重的时候甚至会造成细胞死亡。 2. 缺少贴壁因子:血清中含有促贴壁因子,而无血清培养基工艺中由于缺少这种促贴壁因子,细胞的贴壁效果会下降很多。 3. 支原体或细菌的污染。 4. 培养液配制、储存不当,如pH值过碱,Gln量太少等原因。
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问
犊牛小肠上皮细胞提取不贴壁的问题
天一湖医者
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问
akk培养问题。。。。求助求助求助
天一湖医者
液体培养基变浑浊的原因有以下几点:细胞受到损伤,细胞内容物外露造成的。培养基可能污染了,取部分培养基进行检菌试验
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问
人群PCR分组计算怎么计算
bamboopiggy
这个需要每个sample计算自己的delta delta ct值,所以几百个人和一个人的算法都一样
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问
NCT如果要测好几个基因,加哪个基因的引物呢?
bamboopiggy
NCT针对每个基因都要做的,所以你每个都要加
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问
在跑完定量PCR后,如何处理相对定量数据?
Eason老歌迷
qPCR的数据相对定量分析其实很简单。分享一下自己的经验,最常用,最普遍的相对定量方法就是2^-△△Ct法,该法最最简单的说就是:首先将一次实验的所有基因Ct值整理好,之后用每一组样本自身的目的基因Ct值减去自身内参基因Ct值,得到的数就是△Ct;换成公式就是:△Ct=Ct(目的基因)-Ct(内参基因);然后,将每一组样本每一个目的基因的△Ct都算好,整理进Excel,用本次实验中待研究样本的△C
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问
为什么同样的复孔,会有不同的平台期,即平台期分散?
Eason老歌迷
可能是,你pcr纯化不够,出现了不同产物。
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问
淋巴细胞分离液为什么可以区分PBMC和血细胞?
Eason老歌迷
因为淋巴分离液密度在红细胞和单个核细胞之间啊,他们一离心,不就分三层,那不就可以区分了吗!
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问
原核表达蛋白会出现包涵体,蛋白难以复性,那用真核表达蛋白要如何操作?
天一湖医者
在真核细胞中表达蛋白的步骤比大肠杆菌复杂得多。首先要考虑选用什么载体。一般趋向于使用分泌表达载体,以便于蛋白的纯化。但有的蛋白并不适合于分泌表达,如一些胞质蛋白,非糖基化蛋白等。此外分泌表达的蛋白信号肽存在一个效率问题。有的蛋白即使存在信号肽,也不能分泌。并且有的分泌蛋白较易受到蛋白酶的降解。所有这些因素都需综合考虑。1、克隆 选用合适 的内切酶把外源基因克隆于表达载体的多克隆位点。如果选用的是分
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问
重组蛋白从细胞实验到动物实验
Eason老歌迷
如果研究对象是新化合物或者一些未知剂量的药物等,给药剂量必须在做药理之前确定。我们可以首先确定化合物的毒性,一般可以通过急性攻毒14天(毒理将在后续展开),设置药物梯度浓度,确定化合物安全的给药剂量,例如10mg/kg~100mg/kg;于是我们在该剂量范围内再设置梯度浓度,用几只动物造模确定药效以及药效剂量的关系,大概能够确定EC50(有效中等浓度)。正式实验时,以EC50为中等浓度,上下各设置
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问
测细菌OD600,培养后不明显
Eason老歌迷
加硫酸镁重悬,然后浓缩到相应的倍数,再测,
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问
大佬们,请问我这huh7细胞状态咋样
Eason老歌迷
长的还行啊,别长的太满啊,80%左右你就可以传了
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问
HDF细胞
Eason老歌迷
考虑几点原因,一个是你复苏的过程有没有操作失误,二个是你传代的时间有没有把握好。
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问
LO2细胞培养
天一湖医者
从图片看。是老化了,但是也有污染。
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问
跪求:鼠原代血管平滑肌细胞VSMC经验?
天一湖医者
鼠原代血管平滑肌细胞1)取材:颈椎脱臼处死小鼠,在75%乙醇中浸泡2min,用眼科剪镊依次打开胸、腹腔,暴露心脏;10mL注射器抽取无菌PBS约10mL,连接在1mL注射器针头上穿刺左心室,冲洗主动脉。完整分离主动脉,放入35mm平皿中,加入2mL PBS缓冲液。在体视显微镜下小心将血管周围的结缔组织去除,使用显微弹簧剪沿主动脉纵轴剪开动脉,用显微镊子小心分离动脉中膜层并移入另一个含有2mL含20
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问
求助:购买的原代细胞想自己鉴定,鉴定的时间是什么时候?复苏后吗?
bamboopiggy
复苏后,换液一次后。收集测定就可以
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问
请问大家肽类物质可以做网络药理学吗
Eason老歌迷
可以啊,我刚查了一下,不少这方面的文献。
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硝化细菌 噬菌体
天一湖医者
噬菌体具有体积微小,结构简单和严格的寄生性,必须在活的宿主细胞(如细菌)内繁殖,对寄生的宿主细胞表现出高度特异性,通常能将宿主细胞裂解,为一类属于病毒的微小生物,称之为噬菌体。 其实际意义是可根据噬菌体寄生宿主菌细胞的高度特异性,并使其裂解这一特点用于细菌鉴定,亦可用于流行病学调查时的细菌分型。
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