实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问重组质粒双酶切后看不到目的片段，上面那个载体一万多bp，底下这个载体5000多bp，怎么回事？

Eason老歌迷

连接产物酶切后跑胶没见目的片段可能是目的片段量比较少，没有电泳检测不出，挑菌提质粒后有没有目的片段可以用PCR检测一下。

1 回答501 围观

问进行RT-PCR需要将样本RNA浓度调成一致再进行接下来的实验吗？

Eason老歌迷

最好是把浓度统一一下。RT-PCR的目的是看目的基因在不同样品中的表达量。因此，比较的前体必须是所有样品的总RNA量必须相同或接近相同，通常的做法是用内参基因的表达近似得来反应总RNA的量。

4 回答1367 围观

问多西环素和恩诺沙星在细菌中的工作浓度是多少呀？我用1ug/ml的浓度都不长菌

Eason老歌迷

要是1ug/ml的浓度，都不长菌，那你可以稀释一下看看。

2 回答401 围观

问染料法对DNA含量绝对定量

Eason老歌迷

这个A260/280其实就是用来测dna纯度的。用紫外分光光度计测量样品时，不同成分的样品会有不同的吸光度。260纳米（nm）是核酸的最高吸收峰的吸收波长，280nm则是蛋白和酚类的。一般用A260/A280来检验DNA和RNA的纯度，纯DNA的这个比值约为1.8，纯RNA约为2.0.。所以说如果你的dna不纯你可以先测，然后比对数值，然后纯化。

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问小鼠足细胞培养

天一湖医者

推荐iCell-0001培养基；

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问碱性磷酸酶ALP单位换算

天一湖医者

g=1000mg prot l=1000ml g/l=mgprot/ml g/l=mgprot/ml prot是protein的简写。1卡门氏单位=0.482U

2 回答12574 围观

问IHC染色

balalaLy

第二个的染色太深了，可以调低一点浓度

2 回答1074 围观

问求助：生物钟研究中的（ZT12—ZT16）是什么意思，感谢大佬的指点

天一湖医者

一般是指昼夜节律的时间点，在不同时间段的指标

2 回答5929 围观

问流式细胞仪检测细胞周期的话需要破膜染色吗？需要先固定细胞吗？使用什么破膜？谢谢各位大佬。

Eason老歌迷

需要破膜染色，比如说丙酮破膜法。先固定，可以拿甲醇固定。

3 回答424 围观

问如下图，跑的一个转录因子hes5，没有溶解温度，溶解曲线也不正常，求分析原因。用的条件附上了，提问者其他分子均跑出，技术比较稳定

汤姆卜丽波

这就是引物不对啊，你是不是用错了引物或者引物降解失效了

4 回答281 围观

问图里显示的是我在NCBI上寻找的一个蛋白序列的资料页面截图，请问这里的相关文献怎么查找啊？按照图里的信息找不到

Eason老歌迷

打开NCBI主页；左边search里面选择GENE 右边的对话框里输入你想要的基因名称；在出来的所有条目第一行后面都有种属表明，比如Homo sapiens是人Felis catus是猫。选择你想要的种属；再出现的页面中找到那个像数轴的图，在左侧有可以点击的蓝色数字，往往开头有AK、NM的开头，点击它，再出现的下拉框里选择GENEBANK；最下面就是他的基因序列当然也可以参考页面上提供的CDS区

1 回答317 围观

问细胞实验，对细胞的代数有要求吗？不涉及到基因芯片之类的实验，只是简单的做一下不同处理下目标蛋白的含量差异。

whilt-shirt

一般要求第3代到第10代之间，这期间细胞的状态比较稳定

3 回答376 围观

问用培养法的话应该选什么菌，依据是什么？

Eason老歌迷

我的观点是可以加氨卞西林和四环素。你可能还没搞清楚为什么要加特定抗生素。加入特定抗生素是为了防止杂菌生长。一般生物工程细菌都会带有特定的抗药性，借由加入这个特定的抗生素，就能让经过我们挑选的生物工程细菌在培养基上生长，而其他不带有抗药性的杂菌无法生长，从而避免杂菌污染。

1 回答149 围观

问涂板长了两层菌

Eason老歌迷

是不是你的抗生素失效了，我觉得根据你的情况这种可能性很大，倒平板培养基时一定要保证至少50度以下,否则弄不好抗生素就失效。

3 回答652 围观

问禽流感病毒rt pcr产物跑胶

汤姆卜丽波

你的rtpcr是正常的？但是跑条带跑不出来？是不是表达量不高，这样也跑不出来。

3 回答416 围观

问流式细胞术检测细胞凋亡

Eason老歌迷

可能是你机器没调好，另外你可以多做几组对照一下。

1 回答489 围观

问A549转染后形态改变活性也不太对

balalaLy

加完病毒液之后多久换液？建议早点换液，一般看细胞的状态，状态不好20小时左右就得换液了。

2 回答506 围观

问电转化质粒浓度

balalaLy

质粒浓度一般100ng/ul左右，1:25的体积比例加到感受态中

2 回答3758 围观

问各个器官细胞，有什么独特的表面标志物，可以用抗体靶向？

Eason老歌迷

这个要是细讲起来就复杂了，我就拿几个常见的来举例吧，肝细胞癌的特异性标志物是AFP也就是甲胎蛋白。这些都是可以查到的，你用哪个细胞，你就去网上查一下文献就有。

2 回答357 围观

问生物组织的消解方法，ICP-MS测主微量

汤姆卜丽波

一般是经恒温干燥后,采用硝酸-过氧化氢体系微波消解

2 回答1196 围观

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