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新手小白在线求助!!!
Eason老歌迷
1慢病毒。例如人类免疫缺陷病毒(HIV)、猴免疫缺陷病毒(SIV)、马传染性贫血(EIA)、猫免疫缺陷病毒(FIV)都是慢病毒属,慢病毒属的原文是Lentivirus,其中Lenti-在拉丁文中有慢的意思。你如果想了解具体的慢病毒信息,你可以去购买的官网查一下,基本都有。2我简单介绍一下最经典的慢病毒吧,HIV-1病毒基因组是由两条正链的RNA组成,长度约为9Kb左右,两端是长末端重复序列(LTR
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Zdock出现问题
Eason老歌迷
你先看下你的ZDOCK文件有没有可执行权限,如果有还执行不了,那你的zdock程序肯定不在你执行目录下,如果你不会调这个路径,可把zdock程序放到/usr/bin/目录下,然后执行的时候直接ZDOCK就好。
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实验设计
Eason老歌迷
你既然要看这两个蛋白表达对它的影响,你可以先跑wb看看正常表达情况,然后做设计引物,构建质粒,转染然后做pcr,可以分几组,一组空转,一组敲低,一组过表达,然后慢病毒转入细胞,然后做细胞实验看看细胞侵袭和迁移能力变化,然后做wb看看这几个细胞里的蛋白表达情况,这些差不多够你开了。
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问
求助!求助!
Eason老歌迷
我给你发我找的实验流程,我建议你配置硫酸钠稀释液浓度要合适,不然微嚢容易黏连。
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qpcr求助,溶解曲线双峰
yaonan120
这个基因做了第一次正式实验,发现80度那里提前出来一个峰,觉得是引物二聚体。条件不变,再做一次还是差不多这样。不知道这是不是真的就是引物二聚体还是其他原因?如果是应该改怎么改变反应条件才能不产生引物二聚体?反应体系如下:10ul体系 95度30秒 95度5秒 59度30秒 40个循环SYBR mix 5FP 0.4RP 0.4H20 3.2CDNA 1
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我想做免疫荧光,看NF-kB的入核,请问一抗使用p65还是p-p65呢
balalaLy
一方面可以看总的p65和p-p65进行对比,一方面可以分离核质,跑wb
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怎么收集细胞上清进行酪蛋白ELISA检测?直接保留上清还是收集细胞后离心保留上清?
balalaLy
直接收集不同时间点的细胞上清,离心去除杂质
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细胞铺板后还算均匀,长起来后它又不均匀了
Eason老歌迷
是不是没摇好,培养瓶里面加好细胞以后(比如传代好/分好细胞以后),先顺时针摇晃3次,马上逆时针摇晃3次。然后延X轴Y轴分别水平摇动3次。放入CO2培养箱后,平放着培养瓶重复延X轴Y轴分别水平摇动3次。
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求助激光共聚焦定位图
balalaLy
染色的步骤中有没有破膜?如果有用tritonx-100破膜可能会造成干扰。
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透射电镜看到线粒体里有一个密度很高的黑色圆形是啥呀?
balalaLy
有可能是组织处理过程不好,细胞死亡出现的空泡
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请教:这种想法是否用蛋白组学测序 即可实现?
Eason老歌迷
思路是没问题的。不过需要注意两点。一个是标本量要多,第二个是要设置重复性实验
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关于电转化
balalaLy
电转所需要的质粒量大概在250ng左右,小提操作没问题的话可以满足
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qPCR
balalaLy
一般就是看CT值高不高,和溶解曲线是不是单峰,miRNA CT24 说明表达量也不低呢。
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实时荧光定量PCR条件摸索
balalaLy
cDNA稀释倍数不用太纠结,一般都是按照1:10或者1:20这样稀释,如果需要做的基因数量不是很多,就按1:10,最好按照固定的比例,比如逆转录用500ng或者1000ng的总RNA,然后用1:10这样的比例稀释cDNA,这样你不同批次的实验之间进行对比也比较合理
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细胞麻烦大家看看
balalaLy
看着细胞像是老化,可能是有污染或者消化的过程时间有点太长,细胞状态很不好
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请教一下各位大佬,胃癌BGC823细胞中间的颗粒是啥?
汤姆卜丽波
感觉不像活体物质,可能是杂质掉进去了
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硅藻缺硅同步化处理为什么做不出来?
汤姆卜丽波
实验条件不一样。有可能他做得出来你做不出来。把时间和作用浓度再摸索一下
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问
能不能用酪蛋白ELISA试剂盒检测后,实现对细胞的鉴定而不提取RNA做PCR?
汤姆卜丽波
那你还得提蛋白。。。而且有其他蛋白质存在,ELISA的准确率大大降低
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有人用阿佛丁针灸时麻醉吗?
balalaLy
阿佛丁属于国外比较公认但国内用的少的麻药,我做肌电生理是可以用的,麻醉应该也能用吧
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问
抑郁症模型旷场实验的结果是反的,是什么原因呢?
balalaLy
任何实验出现阴性结果或者反向结果都是有可能的,排除掉各种操作误差,重新再做就是了,一次说明不了问题
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