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问
请问做circRNA的大佬 大家PCR的时候 有p出来好多条条带嘛
Eason老歌迷
出了不少杂带了呗?有很多原因,可能是引物的特异性不高。也可能是酶的用量偏高或酶的质量不好。可能是 Mg2+浓度偏高。或者是 反应缓冲液未完全融化或未充分混匀。也可能是外源DNA污染。
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问
RNAi载体构建
Eason老歌迷
RNAi载体设计与构建中设计过程如下:有研究以pCDNA3.1(+)载体为基本骨架,在其转录单元的5’端添加了一个自剪切的HDV核酶用于切掉转录后的5’帽子和其基因编码序列的3’端添加了一个自剪切的烟草环斑病毒发夹状核酶用于将3’polyA切掉,又在发夹状核酶下游添加了一个加尾信号BGHpA(牛生长激素加尾信号)。为了更加保险的防止通读现象的发生在BGHpA加尾信号下游添加了一个自我剪切的烟草环斑
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问
3t3-l1细胞诱导出现了这种情况
bamboopiggy
感觉你的细胞是污染了,不能继续往下做了,重新复苏吧
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问
质粒稀释后细胞上样浓度是160Nm,想计算100ml稀释液中需要多少ug干粉?
Eason老歌迷
ug/L和ng/ml其实可等量换算,因为1微克=1000纳克,1升=1000毫升。如果现在的标准单位nmol/L换算成原来的老单位ug/L,应除以3.12,即nmol/L/3.12 =ug/L
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问
3T3L1细胞分化和油红染色
天一湖医者
有可能是异丙醇分化时间过长导致。
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问
主动脉夹层动物模型
Eason老歌迷
雌性动物受性周期、受孕等因素的影响直接干扰实验指标,因此在实验对性别没有特殊要求时一般选用雄性动物或雌雄各半。
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问
求助,大鼠肺动脉压测定,舒张压太高
Eason老歌迷
我看了挺多文献他们造出来的肺动脉压力都很高。虽然也有15mmHg左右的。但是我感觉你还是操作的有问题,不然怎么大部分都是这个趋势。
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问
大鼠死亡剖检肺组织病变分析。感谢
Eason老歌迷
这是灌药整肺里了吧,直接肺水肿致死了,粉红色泡沫样痰了都。
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问
求助,对照组大鼠肌酐升高30-70%
Eason老歌迷
你要是取就取同一个部位的,是不是不同部分本来就有偏差呢?
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问
提取RNA
Eason老歌迷
肯定会影响啊!你说你一个孔里长的多,一个孔里长得少,怎么分裂解液,多了裂解过火了,少了裂解不足。
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问
筛选差异基因时发现一基因在A组表达上调,在另一组下调表达,怎么解释这种关系?
天一湖医者
正常现象,做转录组项目,最重要的就是看每个基因的表达量,根据表达量差异找出差异基因,从而研究差异基因的功能。而在作图之前最重要的就是按照特定条件找出差异基因,按需筛选差异基因:1.共有差异基因;2.共有上调基因或共有下调基因;3.一组上调,另一组下调基因。
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问
求助LC/MS检测circRNA翻译产物的问题
天一湖医者
质谱测序不能cover你所有的序列,也就是说你通过它能知道你基因的reading frame没错,但不知道这个蛋白的开始和结尾在哪个点上。我觉得最好的办法用质谱测你完整蛋白的分子量,如果和你的理论值一样,那就是蛋白在胶上的电泳行为的问题,
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问
A549细胞培养问题
天一湖医者
细胞出现空泡的原因很多,可以归结为细胞老化和衣原体感染两个主要原因。1.细胞老化。 原代细胞培养的过程中经常出现这样的情况,是有些细胞处于终末分化状态,不会再分裂,时间长了就会空泡化而死亡。传代细胞出现这种状况比较少见,可能的原因是细胞代龄较长,老化严重。2.衣原体感染。 一旦一些细胞出现空泡化,继续培养,空泡范围会扩大,即使传代后也如此,出现这种情况,细胞基本无法挽救。后来检测发现,此种细胞存在
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问
谁做过人源MCSs成脂实验呀
天一湖医者
1.从单层细胞中收集MSCs;2.向6孔培养板的每个孔中加入2ml CCM,共有1&time105个细胞。最终密度约1&time103个细胞/cm2;3.将上排3个孔标记为“成脂”,下排3个孔标记为“阴性”;4.在37℃,5%CO2环境下孵育,每隔两天更换一次培养基,直到细胞达到7.%—80%汇合;5.达到所需的细胞密度时,从孔中吸出完全样机,向6孔培养板上排的孔中加入2ml FD
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上游引物连微球
天一湖医者
这个要看引物长度较短,一般会降低扩增特异性,但会提高有效性,扩增的产物种。
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问
最近做信号通路,为啥上游的蛋白表达降低,下游蛋白表达升高?
balalaLy
上下游蛋白已知的调控关系是促进还是抑制?如果是抑制关系那就是正常,如果是促进,那你可能需要做一下不同的时间点,或者下游蛋白的活化状态。
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问
35kb的目的蛋白跑成一条线
balalaLy
同一块胶的其它蛋白没问题,说明是这个抗体的问题。抗体失效、降解
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问
请各位大神帮看都是什么污染,图片1- 5都是400倍观察污染的,6、7和8、9是污染前后细胞对比照。培养液不浑浊 易变黄细胞易脱
bamboopiggy
感觉是支原体污染,如果是重要的细胞,就加点支原体清除剂吧
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问
用raw264.7诱导破骨细胞,加rankl 100ng/ml, m-csf 50ng/ml,诱导9天,trap 染色
天一湖医者
收到细胞后:内含的纸条上建议马上/尽快传代,换新的培养瓶和培养液。我的经验是直接将细胞放到培养箱中适应环境数小时或过夜。
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DNA杂交实验中的解离问题?
天一湖医者
可能已经降解了,严格进行操作吧.
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