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问
Western blot实验有阳性条带,但条带信号弱的原因是什么?
whilt-shirt
抗体浓度过低或者特异性不强,建议增加抗体浓度和敷育时间试试
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问
移除小鼠回肠组织后,保存前需要如何处理?
天一湖医者
保存的目的是什么,如果用病理或组化,可以用固定液固定,或者先放液氮,然后再转入冰箱冷冻,不过长期保存也是有时时间的,不知道你想保存多久。
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问
细胞BSA蛋白定量怎么调整啊,每次跑出来条带都歪?
天一湖医者
我觉得有两种可能:一、做胶时没有充分混匀二,上样buffer 可能有问题
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问
wb同样的蛋白样品,跑三块胶,为什么有的内参齐,有的内参不齐?
天一湖医者
一般是跑胶时电流或电压太大。还有可能是样品中参杂着盐离子等其他物质也会造成跑不齐。
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问
乳剂状疫苗如何提核酸。
天一湖医者
乳剂状疫苗可以用离心柱法提核酸。
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问
小白做+WB
天一湖医者
减少抗原上样量,降低一抗浓度,改变一抗孵育时间和温度
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问
WB条带连一起是什么原因?
天一湖医者
wb时连成一条线可能有以下几种原因:1)上样量过大 这里指的是质量数过大,一般上样在20-100ug之间就可以,楼主可以减半上样量,试试看。2)一抗孵育时间过长,适当缩短孵育时间,也可以改善。3)一抗浓度过大 ,抗体如果很好用的话,增大稀释比例试试。4)曝光时间过长,同样会由此现象。但是这其中,上样量影响最大,建议楼主其他条件不动,减少上样量试试,可以减少一半。
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问
小鼠合笼两个月还没有怀孕,怎么处理
whilt-shirt
可以换新的种鼠或者喂养鸡蛋生瓜子增加小鼠营养
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问
小鼠肾脏透明病变
whilt-shirt
有可能是肾水肿,建议做个病理切片看看
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问
请教小鼠小肠组织的处理及短暂保存?
天一湖医者
如果用病理或组化,可以用固定液固定,或者先放液氮,然后再转入冰箱冷冻,不过长期保存也是有时时间的。
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问
跑磷酸化的蛋白总是杂带很多,该如何避免
whilt-shirt
使用5%BSA封闭,减少一抗敷育时间
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问
请问,细胞ELISA中空白细胞本地比实验组OD还好是为什么,OD一般控制范围在多少合适呐?
Eason老歌迷
正常情况是样品OD值和空白孔OD值都比较低,样品OD值略低于空白孔OD值。一般od值控制在2左右
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问
常规35-200之间的蛋白,应该用0.45还是用0.2um的转膜纸(pvdf)呢
whilt-shirt
0.45um的就可以,如果是小于10kd的蛋白那就要0.22um的
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问
提取内质网沉淀如何非变性溶解?
天一湖医者
在提取后的蛋白沉淀中加入适当量的溶解液,加入溶解液的体积需要根据蛋白沉淀的大小以及下游实验所需的蛋白浓度决定。
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问
转膜后,如何选择抗体,敷抗体的时间怎么把握?
Eason老歌迷
根据你跑的目的蛋白选择一抗,然后二抗的话就根据你选的一抗种属来选择,一抗是鼠的就选抗鼠,一抗是兔的就选抗兔。一抗一般都是4℃孵育过夜。然后二抗常温孵育1.5h,别孵育太久。你可以做几次预实验,调整一下孵育时间,看看什么时间最合适。
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问
BCA法蛋白定量后,内参条带仍然不齐,怎么办?
蜡笔小迟
组织定量本来靠测浓度就不准,建议:先测浓度,按浓度跑内参,然后按内参灰度调整上样量。
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问
加入碧云天5x上缓冲液变性后,上样会漂样怎么办?
笋干CAU
我之前电泳缓冲液忘了稀释直接用的5x 样品就漂起来了
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问
原代细胞的转染
Eason老歌迷
还挺好转染的。一般常用的方法都是电穿孔法,磷酸钙共沉淀法,腺病毒转导,脂质体转染等。
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问
酒精性肝损伤
whilt-shirt
一般选用6-8周,20-24g的成年雄性小鼠
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问
如何用七氟烷处理细胞?
bamboopiggy
你这个可能要用到七氟烷挥发罐,用特殊的chamber将细胞养在里面。
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