实验问答

22,112,795 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问细胞培养基里的分泌蛋白怎么提取？提出来以后还要加到另一个细胞培养基里

天一湖医者

将要浓缩的蛋白溶液放入透析袋（无透析袋可用玻璃纸代替）,结扎,把高分子（6 000－12 000）聚合物如聚乙二醇（碳蜡）、聚乙烯吡咯、烷酮等或蔗糖撒在透析袋外即可.也可将吸水剂配成30％－40％浓度的溶液,将装有蛋白液的透析袋放入即可.吸水剂用过后,可放入温箱中烘干或自然干燥后,仍可再用.

3 回答2030 围观

问胰酶污染的话有什么表现吗，怎么判断

天一湖医者

胰酶污染的话表现:胰酶浑浊，色黄（偏酸），有臭味儿，镜下见到球菌。

3 回答2057 围观

问PI3K/AKT/mTOR信号通路 WB相关疑问?

天一湖医者

一个是PI3K/AKT/mTOR信号通路这个是存在磷酸化的，我觉得你在提蛋白的时候需要加磷酸化抑制剂。二个是你可以跑个18s看看，我觉得大概已经出来了有几个下调的，整体上抑制这个通路

3 回答1439 围观

问WB目的蛋白底下出现一条非常强烈的条带

天一湖医者

有可能是因为多克隆抗体，特异性不强。识别其他蛋白含量比较多的蛋白，所以非目的蛋白颜色就比较深。

5 回答472 围观

问蛋白电泳问题

bamboopiggy

你蛋白浓度感觉有点低，浓缩胶有点短，没把条带压好

3 回答390 围观

问琼脂糖PCR凝胶电泳失败求助

balalaLy

这种涂抹状的条带一般是样品降解了

3 回答375 围观

问MRC-5污染

天一湖医者

从图片上看，应该是细菌污染了。

3 回答243 围观

问细胞加药-药物浓度

balalaLy

这要看两种细胞对这种药物的耐受程度。但是呢会有一定的参考价值。可以在A细胞的有效作用浓度为参考进行预实验。

3 回答648 围观

问Caco-2细胞几天分化几天长满？

天一湖医者

Caco-2细胞生长良好时5天左右长满。

3 回答1279 围观

问急求大佬解决qpcr问题

Eason老歌迷

可能还是你的体系问题。我的经验，在20 ul 的逆转录系统中加入1 ug RNA。然后将cDNA稀释50到100倍，（即1 ul的RT产物加49 ul 水），取 2ul 用于qRT-PCR （20 ul 体系）。GAPDH的Ct 值在19～20范围内。

4 回答348 围观

问双酶切鉴定实验有目的条带，但是底部也出现非特异性条带。

Eason老歌迷

可能是出现了非特异性酶切。你确认一下有没有下列情况发生：1.限制性内切酶在你使用的buffer体系中存在非特异性酶切的情况。2.酶切时间过长，我试过最长切过8小时，有一些内切酶会出现这种情况了。3.配的酶切体系当中，酶的体积超过了总体积的10%，过量的甘油会影响。4.酶切温度不对，不是所有的酶都是在37℃下工作，同样，检查一下你的水浴锅的显示温度和实际温度是否一致。

2 回答430 围观

问PI3K/AKT/mTOR信号通路 WB求助

Eason老歌迷

有几个原因。一个是PI3K/AKT/mTOR信号通路这个是存在磷酸化的，我觉得你在提蛋白的时候需要加磷酸化抑制剂。二个是你可以跑个18s看看，我觉得大概已经出来了有几个下调的，整体上抑制这个通路。

2 回答3156 围观

问shRNA设计

Eason老歌迷

不需要去掉，siRNA序列最后两个碱基TT不需要去掉。shRNA包括两个短反向重复序列，在活体中输送“小干扰RNA”（siRNA）的一种办法是，将siRNA序列作为“shRNA”克隆进质粒载体。

2 回答1042 围观

问Caco-2细胞 Gibco血清

Eason老歌迷

你可以在细胞分离和传代中使用选择性培养基试一试，我之前试过效果挺好。

3 回答216 围观

问RNA提取液（25：24：1，PH<5.0）的提取效果及使用方法

Eason老歌迷

rna提取液的提取效果很好，具体使用方法和trizol法差不多。苯酚使蛋白质变性，同时抑制了RNase的降解作用。氯仿抽提加速有机相与液相分层，去除核由于苯酚与水有一定比例的互溶，所以如果使用非饱和酚，样品中的水分会进入酚相，样品会丢失。同时水相中也会有少量的酚，这些残留的酚会抑制后续酶反应。而饱和酚就没有丢失样品的缺点，因为它已经提前充分吸足了水分（饱和酚中含10%左右的水分），因此不会丢失样品

2 回答4870 围观

问P-JNK P-P65蛋白在细胞哪一部位表达？

bamboopiggy

去genecard上去看，这两个蛋白的说明，里面有图，标出来这俩蛋白的表达位置

3 回答534 围观

问LPS时而有效时而无效是什么原因呢？

Eason老歌迷

你的浓度太大了，建议你做一个预实验，找到一个合适的浓度区间。

3 回答1169 围观

问求问脂肪组织石蜡切片HE染色步骤

balalaLy

切好片捞片的时候贴平整，烤片时间一定要够，还有就是如果是间隔一段时间再做染色的一定要二次烤片。

3 回答3542 围观

问求助！为什么低浓度的化疗药物竟然比不加药的对照组OD值大

balalaLy

我发现大多数的药物都是这样，在低浓度的不仅没有细胞毒性反而能起到一定的增殖效果。就是单纯的DMSO在较低浓度时也有这样的效果。所以如果你要做化疗药物的细胞毒性作用的话还是要选择IC50相近的浓度可能才会有比较好的结果。

3 回答511 围观

问求助😭以前取的小鼠心脏，没有灌注，直接-80冻了，现在要做切片并且提RNA和蛋白，请问里面的血液影响大吗？要怎么消除影响？

bamboopiggy

不灌注固定，血液对冰冻切片影响大，你这个组织不适合做切片了，提rna和蛋白尽量只取心肌影响就不大

2 回答2120 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序