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问
PVDF膜显影总是出现竖纹,可能是什么问题?
balalaLy
胶没有配好或者蛋白样品有杂质,样品从冰箱取出加样之前加热一下
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问
蛋白免疫印记实验结果不稳定,有什么优化方案
麻黄连翘赤小豆
上样量保持一致每次步骤一致用量抗体一致如果实验出现问题,每次更改的步骤必须记录,以便对比室温尽量一致
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问
投稿时,qPCR有数据不是很完美会被拒稿吗?
yanlai000
内参35???重新提RNA吧,完了测浓度
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问
层析纯化后的腺病毒接毒不病变
Eason老歌迷
你接种病毒病变时改变血清浓度没有,我们养细胞时血清是10%,而稀释接种病毒时血清浓度是2-3%。
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问
琼脂糖凝胶电泳
illusio
可能是制胶时带入了杂质,形成了障碍物,使得条带电泳时受到阻碍无法继续电泳,从而形成扭曲。或是制胶时溶胶不完全以致琼脂糖颗粒残留,形成一些浓度较高的区域,在DNA电泳经过这些区域时,部分DNA被阻碍在这里
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问
基因多态性实验,基因测序结果分析
Eason老歌迷
你可以用gwas,dnastar来分析。然后你的测序结果与参考序列进行比对,当然前提你是知道你的参考序列的突变位置,如果你的参考序列上是A,而测出来的结果是T,那就是一个突变型,还有可能就是杂合突变。
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问
用来提RNA的组织样本可以在-20放多久?
陈皮712
最好1周内用完,或者放到-80冰箱、液氮以便长期保存。如果只有-20冰箱,可以在组织中加入组织保存液(很多公司有生产,不是很贵)。
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问
细胞长满但是提的RNA浓度低
陈皮712
RNA的质量还行,浓度偏低,但这个浓度也可以继续往下做。不知道你是用Trizol法还是柱法,如果是柱法提取,RNA浓度会比较低,但纯度会更好。Trizol法提取RNA的浓度会比较高,但杂质也相对较多。Trizol法用得更多一些。首先,加入Trizol后,T25瓶的细胞倒掉培养基,不用PBS清洗,直接加0.8-1ml Trizol,铺瓶,放4度冰箱充分裂解10分钟。然后,开一把新的细胞刮刀,充分刮,
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问
western膜的保存 strip心得 显多个蛋白
balalaLy
我自己的习惯是保存在tbst里边,一个星期内是可以的,我课题组有个博后是把条带放吸水纸上弄干然后用保鲜膜封起来,说是以后需要补实验的话可以再拿来用,她博士阶段经常这样做,是可行的
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问
一种色素的降解产物是否用于另一种色素的合成,除了同位素标记还有什么生理生化的方法呢?
Eason老歌迷
除了使用同位素标记,你还可以使用标签,把降解产物标上标签
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问
目的条带先胶回收再双酶切还是双酶切再胶回收
balalaLy
先少量跑胶验证目的条带是否存在,如果条带单一,可以直接用剩下的做双酶切
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问
大家有用过无血清体系培养iPSC吗?效果怎么样?
Eason老歌迷
我用过,效果还OK。主要是无血清培养基不含血清,提高了实验的重复性、准确性和稳定性。避免了血清所带来的血源性污染等问题,减少血清未知成分对细胞的损伤。无血清培养基的成分和含量相对明确,能提高细胞产品的质量并有利于产物的分离提纯。
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问
请问我这个是什么情况,敷上一抗以后膜上目的条带的位置可以看见灰色条带,但是扫膜看不到目的条带(内参没问题)
whilt-shirt
有可能是二抗的问题,建议重试。
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问
LAMP引物设计过程中出现300多条,如何进行筛选?
Eason老歌迷
300多条引物?你就从gc含量,从产物长度,从有无二聚体产生,有无错配等筛选,肯定合格的就少了
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问
如何检测耗材上的DNA酶和RNA酶
illusio
一般用PCR检测,电泳基本检测不出来
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问
差异基因没办法富集到通路怎么办?
陈皮712
换一个数据集试试,有时候GSEA的数据集不一定是最新的。另外,也很有可能,这些差异基因,就是没办法通过GSEA富集的。也就说它们的确存在差异表达,但不能整体地调控某条通路。
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问
悬浮细胞甩片做免疫荧光染色
yanlai000
普通显微镜下可以看到的话那可能是共聚焦显微镜使用不熟练导致,共聚焦的Z轴比较精准,先低倍在白光下找到细胞,然后再高倍找,找到细胞后再打开激光观察,注意记录Z轴的数值方便下次快速聚焦
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问
qPCR熔解曲线乱,有主峰,但有杂峰,80°C以下90°C以上都有,为什么
爱吃水稻的小呆瓜
建议定量引物先跑一趟琼脂糖电泳看一下条带,如果条带单一明亮,再去跑定量。如果还有很多峰,可能是引物二聚体,建议更换引物试试
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问
qpcr溶解曲线双峰
爱吃水稻的小呆瓜
可能原因有以下几点:1.样品有gDNA污染2.引物不够特异3.引物二聚体建议先跑琼脂糖电泳,看条带亮度和是否单一,之后再跑定量
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问
qPCR内参ct值偏低(小于15,12、13左右),而目的基因ct值正常
yanlai000
建议稀释5倍(样品:无酶水=1:4),这样理论上Ct值增大2.3
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