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问
WB曝光后背景噪点太高,求大家指点
土井挞克树
背景噪点高是由于 ① 膜封闭时间不够,室温下通常摇床孵育膜 1h,出现这种情况可以更换合适的封闭液或者适当延长封闭的时间; ② 抗原抗体免疫过程中一抗稀释度太高,可以多设置几组一抗浓度,摸索最适宜的抗体稀释度; ③ 在整个实验过程中膜发生干燥或手套反复接触过也会发生背景值高的情况,因此实验过程中要注意保持膜的湿润,使用镊子夹取膜。
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问
免疫荧光,一次能做到几色?会相互干扰吗?
土井挞克树
可同时做到五个通道,他们不是相互干扰是发射光谱会重叠
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问
请问有没有undefined到undefined的DNA聚合酶
土井挞克树
DNA聚合酶III这种酶既有5’→3’方向聚合酶活性,也有3’→5’核酸外切酶活性。该酶的活性较强,为DNA聚合酶Ⅰ的15倍,DNA聚合酶Ⅱ的300倍。他能在引物的3’-OH上以每分钟约5万个核苷酸的速度延长新的DNA链,是大肠杆菌DNA复制中链延长反应的主导聚合酶。
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问
组织wb之怪异
balalaLy
有没有可能是前两个样品含血液量多,混进了过多的白蛋白?
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问
求助:Wb条带求大神解答
土井挞克树
可能是洗膜的时间和次数不够,延长洗膜时间。
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问
Marker跑成U字型,以及酶切结果
balalaLy
不止marker,其它条带也是u字型,应该是你的胶的问题。第五道的单酶切你对照一下你的质粒的大小是不是对应的,是的话就是这个单酶切成功了,第4道单酶切是不是这个酶不止一个酶切位点?而且切得不完全,第6道符合前面说的4、5的问题,第7道质粒比其它酶切过的线性DNA跑得快,也是对的。
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问
小鼠皮下肿瘤拍照问题
juyue2010
有标尺,一组一组拍照,可以对比
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问
老鼠胎盘
Dr_劉医生
应该是副胎盘,胎盘小叶发育不全导致的,主要你的崽鼠数量够,没多大问题
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问
求助|DSS造急性结肠炎成模标准
balalaLy
有一个评分表的,要综合体重、大便形状,血便的情况,一般3%的浓度7天体重和血便情况都会比较明显了,你这个明显还没有达到,延长时间或者将DSS浓度提高一点。
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问
产生孢子数量很少的放线菌如何配成一定浓度的孢子悬液呢
明査日月
适当提高培养液浓度增加营养 延长培养时间
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问
microRNA,circRNA,lncRNA,ceRNA,siRNA,shRNA有什么区别?
balalaLy
microRNA,circRNA,lncRNA,ceRNA,siRNA,shRNA有什么区别都是RNA,microRNA小RNA,circRNA环状RNA,lncRNA长链非编码RNA,ceRNA 内源竞争RNA,这些都是内源RNA,siRNA,shRNA是人工合成的,导入细胞后可以干扰或敲低目的RNA的外源性RNA
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问
抗体1、2ul,应该用什么方法纯化
Eason老歌迷
可以试一试Protein A和protein G纯化法。基本原理就是protein A和proteiin G 可以和抗体IgG分子的Fc段特异性结合。Protein A和protein G 作为配基可以被偶联到琼脂糖凝胶上,当抗血清从中流过时,特异性的IgG就与配基结合,其他杂蛋白则穿流而过。因两种蛋白纯化抗体时对不同宿主的抗体的结合能力不同,我们需要具体情况具体对待,分别选择protein A
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问
蛋白沉淀
明査日月
加百分之十甘油对后续实验不会有影响
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问
qPCR的图方差很大怎么办?
juyue2010
若是技术重复导致的话,是操作问题,先做好mix,再分别加到每个孔,操作时间别太长,加好样直接上机。若是生物重复导致的话,那就是说样品处理平行度差
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问
PFA灌注固定的组织样本如果暂时不用应该怎么保存呢
balalaLy
1-2天的话可以泡在PFA中4度保存,时间长的话最好脱水后-80度冻存。虽然固定了,4度放太久也是会变质的。而且固定得越久后期的染色效果越不好。加入叠氮化钠也会对结果有影响,而且这个大小致癌,建议能不用就不用。
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问
灵敏度与特异度的提问
Dr_劉医生
可以用,类似于构建预测模型和已知的模型进行对比,但有个问题,你的筛查方法1检出阳性(就是灵敏度)也得参考金标准来,确认假阳性率有多少;不然单独筛查2用金标准存在误差
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问
中位生存时间大于中位随访时间
juyue2010
你的随访时间提前已固定,而中位生存是回归计算出的,不一样很正常
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问
膜蛋白内参选什么
balalaLy
有一种说法是actin不在膜上面表达,而GAPDH有表达,所以GAPDH会适合一点
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问
请问这是细胞污染了吗
土井挞克树
看镜下影像是污染了,需要清理培养基
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问
细胞污染
balalaLy
是真菌吧,用过的培养基可能也要排除一下,耗材得重新高压灭菌
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