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问
流式T淋巴细胞绝对计数
土井挞克树
可以用玫瑰花环试验,又称为花结试验。是测定小鼠淋巴细胞数量和功能的一种方法或者你直接做流式也可以
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问
血吸附实验的具体操作步骤?
土井挞克树
.2 方法1.2.1待检样品制备将待检细胞经无抗生素培养基传1代,取三天未换液的且已长成单层的细胞,反复冻融3次,1000rpm离心15min除去细胞碎片,收集上清液,过滤除菌后即为待检样品。悬浮培养型细胞直接冻融后离心,同法制备待检品。1.2.2 接种培养1) 致细胞病变试验二倍体细胞、Vero细胞以及与待检细胞同种属同组织类型的细胞,每组细胞6瓶,每瓶20ml,每瓶接种待检样品3ml。于5%C
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问
求小鼠T淋巴细胞绝对计数方法
土井挞克树
可以用玫瑰花环试验,又称为花结试验。是测定小鼠淋巴细胞数量和功能的一种方法
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问
为什么这个蛋白有两个条带
Eason老歌迷
很可能是该蛋白出现了同源二聚体,故都可以被抗体识别出来或者该蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗体结合另外抗体特异性不高,也会出现非特异性的结合,造成出现两条或者多条带。
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问
同一条带曝光结果前后不一致
Eason老歌迷
同一张膜,本人可以在成像的时候,做出完全不同的图片结果。显色液的滴加,量,以及曝光时间,条带颜色(要求灰色而不是黑色)。所以最好有图片说明问题。
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问
想比较两种营养干预对小鼠肠粘膜Muc2表达的影响,用切片好呢?还是用提mRNA?
土井挞克树
还是用mrna比较好,结果准确可信
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问
做空肠的免疫荧光,测杯状细胞和潘氏细胞数量,可以在同一切片上同时染吗?
Eason老歌迷
可以的,是可以在同一切片上同时染色的。
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问
纯化抗体时,磁珠总是拉不下来蛋白,怎么办
Eason老歌迷
可能是你的洗脱调节太温和。提高洗脱液咪唑浓度至500mM,还不能洗脱时,可以尝试降低洗脱液pH至4.0,但低pH会也导致金属离子脱落;也可能是 蛋白吸附在磁珠上无法洗脱。对于非特异性疏水吸附的蛋白,可以增加NaCl浓度至1M,或添加0.1%~2%的Triton X-100。对于聚集沉淀在磁珠上的,可以在洗脱缓冲液中加入6M盐酸胍进行变性洗脱。
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问
流式分析调整染色补偿需要注意什么?
此用户已注销
需要注意的是:单色阳性样本需要有足够的阳性细胞使用和样本相同的颜色,确保强度不低于样本如果用微珠代替细胞,要注意某些细胞的染色可能强于微珠上机后,先调整电压,使目标阳性峰在自己的通道上高于其他的通道记录数据,就算补偿
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问
苏木素用久了颜色变黄
秋秋欣欣
可以人工氧化让苏木素变回红色,仍可以继续使用
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问
文献里已知检测限0.5amol,如何计算转化成拷贝数/ml呢?
Eason老歌迷
计算公式为6.02 x 10(23)) x (ng/ul x 10(-9) ) / (DNA length x 660) = copies/ul。如果DNA/RNA的量是ng/ul,那么拷贝数(copies/ul)=[(ng数×10的-9次方)×(6.02×10的23次方)]÷(碱基数×345)例:3000 碱基质粒,浓度100 ng/ul ,MW= 3000 bp x 660 dalton/bp
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问
请教一下这种图怎么看呀
土井挞克树
这个图里面横轴代表的是核糖核酸,纵轴是表达产物,一是空白对照,有加号是有统计意义,后边是条件不同时的产物表达
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问
差异基因后面先做蛋白分子互作还是富集分析
balalaLy
1就是简单的生信分析,文章不会很高分,2的话工作量会很大
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问
细胞周期
土井挞克树
一般都是流式看细胞周期G0/G1期:流式检测结果图的第一个峰;G1期是DNA含量最少的时期,DNA复制还没有开始;G0期是细胞静止期,不复制DNA,无法与G1期分开,所以报告为G0/G1期; S期:在流式结果图中显示为第二个不高但很宽的峰;此时期细胞开始复制到完成复制,是一个一倍DNA到二倍DNA的过程; G2/M期:流式检测结果图的第三个峰。G2期是DNA复制完成至分裂的一段时间,此时细胞内
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问
应该选择什么样的miRna进行研究才有意义
c_Yeats
首先是要选择差异倍数相对大的去做qPCR的验证,结果一致的再选出来对应鼠源和人源,再去做进一步的机智研究。
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问
胰岛素抵抗导致内皮损伤的细胞模型
paj12345
可以的,葡萄糖和果糖都属于常见的单糖,都能被细胞吸收利用,狭义的胰岛素抵抗是指葡萄糖利用率下降,类比果糖的利用率也会下降。
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问
求助:人外周血单个核细胞分离、冻存的问题。
huarenqiang5
细胞分离 外周血用电动助吸器按照每管不多于35ml。平均分至50ml离心管中, 931×g,离心8min,吸取上层血浆至50ml 离心管中,取1 5 m l于E P管中。标记。 -80℃保存。用NA稀释血细胞,使得血细胞:NA为1、 1,混匀后均匀缓慢地加至相应的A液上层。形成完整的界面。 596×g。离心20min。可见明显分层。吸弃第1层上清。小心轻柔地将第2层的白色细胞层分别吸至
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问
流式细胞仪器如何调整补偿,关于这方便有什么参考的文献或者书籍吗?
elabscience
补偿基本方法同下图,更多内容可以直接查看流式细胞术相关书籍。
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问
做实验想用流式细胞术分析细胞周期及凋亡率,都需要用到RNAs酶,可以一起检测吗?
elabscience
如果仅采用PI单染法,通过观察sub G1峰来判断凋亡的话是可以同时检测的;如果是采用Annexin V法来检测凋亡,则不能和周期同时检测,因为周期需要固定细胞,而Annexin V法需要使用活细胞。
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问
请问流式检测结果图框选阳性区域时,如果没有明显的分区,都认为强度>10^1为阳性吗?
土井挞克树
是的,所以在流式之前都建议选好分区
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