实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问求助问一下这油脂块一样的东西是污染了吗，刚复苏就有，感觉是悬浮的，可以洗掉，貌似也不怎么影响细胞生长，但是养几天就会出现

周末也要努力呀

建议离心时候加PBS多洗几次，更换培养基

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问两个基因一起做干扰过表达的实验步骤

feixue7758527w

希望对你有用第一步:选择目标基因首先需要选择要过表达的目标基因。这个基因可以是已知的,也可以是未知的。如果是已知的基因,可以通过文献调研或数据库查询来获取该基因的序列信息。如果是未知的基因,可以通过基因组测序等方法来获取该基因的序列信息。第二步:构建表达载体表达载体是将目标基因导入到细胞中的工具。常用的表达载体有质粒、病毒和细胞质注射等。在构建表达载体时,需要将目标基因的序列克隆到载体中,

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问脉动真空灭菌器的选型依据

周末也要努力呀

在贵实验室购买器材平台搜索后按照销量排序，选择价格合适销量高厂家有售后保证的

3 回答378 围观

问做相对定量时，不同样本的cDNA可以稀释成不同的倍数吗？

周末也要努力呀

可以稀释成不同倍数，与结果无显著影响

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问抗血清的倍比稀释问题

周末也要努力呀

最好是稀释后逐步稀释，这样误差小一点

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问wb条带异常，求大神解惑

feixue7758527w

没有目标条带啊，你还是看看抗体的问题，尤其是一抗是不是有问题了

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问为什么用DMEM培养细菌，培养出来，血清瓶里变红了

橙汁儿青柠味

dmem里面含有酚红，细菌会是ph值升高，所以变红了

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问请问各位用什么药物诱导细胞氧化应激而建立氧化损伤模型呢？🙏

高山云初

可以用过氧化氢来诱导细胞氧化应激

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问请问用DNS法（3,5-二硝基水杨酸法）测定绿豆叶片或茎的还原糖时样品应该怎么处理磨样然后离心吗

土井挞克树

研磨，分离，萃取，离心之后收集

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问求助🆘细胞种板后，想计算细胞培养板里每个孔的细胞数，应该如何操作？

huarenqiang5

计算方法：（4个大正方形内之细胞数目之和×稀释倍数× 104）/4=每 mL 悬液中的细胞数目。

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问求助🆘细胞铺板前进行了计数，根据计数结果进行铺板，之后细胞长满后每孔的细胞数量还用计数吗？

Keven轩

一般不需要了，除非显微镜下明显看出细胞死了很多

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问哪位大佬有“吸头规格和移液器量程适配”这块儿的文档或者知识库呀，分享一下，不剩感激

周末也要努力呀

一般来说，吸头的容量应该小于或等于移液器的量程。例如，如果移液器的量程为0.1-1 mL，那么适配的吸头容量应该小于或等于1 mL。如果吸头的容量为2 mL，那么它就不适合与该移液器一起使用。

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问该实验中重铬酸钾可以用丙酮代替吗，去除脂肪用？胰蛋白酶过程是否可以通过使用梯度甘油进行透明来代替？

huarenqiang5

可以用丙酮代替重铬酸钾以去除脂肪。

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问关于真核胞内表达蛋白的纯化

周末也要努力呀

对于胞内表达的蛋白纯化，可以采用以下步骤：1. 细胞破碎：将表达目标蛋白的细胞收获后，通过超声波破碎或其他方法破碎细胞膜，释放细胞内的蛋白。2. 蛋白提取：使用适当的缓冲液提取蛋白，可以加入一些辅助剂如盐、洗涤剂等，有助于蛋白的溶解和稳定。3. 清除细胞碎片：通过离心或其他方法，将细胞碎片和细胞核等杂质清除，得到较为纯净的蛋白上清。4. 亲和纯化：如果目标蛋白具有特定的结构或功能域，可以利用亲和纯

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问光合测定仪3015D的人使用方法详细步骤

高山云初

1.将主机和手柄用数据线连接起来。打开电源开关,预热5-15分钟,如果环境温度低于25℃,需适当延长预热时间至15分钟左右。2.根据不同植物、不同光合速率在“默认设置参数”内设定不同的测量间隔。3.设置完成后进入测试数据界面,按“气泵”键打开气泵,使手柄叶室内的空气与主机之间进行交换。按下压柄,夹住需要进行测量的叶片。4.夹住叶片后,观察二氧化碳和湿度变化,当二氧化碳变化开始匀速下降、湿度增加时

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问请问一下有人用cd19和cd27分选记忆B细胞的吗？

羽2BRD

你看一下抗体是不是选择种属错了，或者是因为样品的表达水平不够，需要添加诱导剂或者更换更敏感的进口的抗体

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问请问大家给小鼠滴鼻能进气道吗？我的基本都进胃里了，不知道怎么养滴能进气道呢？

feixue7758527w

滴鼻可以进入气道的，小鼠滴鼻子的时候适当刺激一下试试，注意滴鼻子的角度，个人认为稍微快一点还是有效果的。

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问请问RNA-seq技术的具体流程是怎样的？有哪些文献可以参考？

huarenqiang5

1. workflow进行差异表达基因分析的前提是，获取代表基因表达水平的矩阵。因此在进行分析前，必须知道基因表达矩阵是如何产生的。在本教程中，将会简要的介绍从原始测序读数到基因表达计数矩阵过程中，所采取的不同步骤。下图是整个分析过程的流程图。2. RNA提取与文库制备在对RNA 进行测序前，必须从细胞环境中提取和分离出RNA 制备成cDNA 文库。下面将介绍涉及的许多步骤，其中还包括了质量检查，

4 回答1013 围观

问想问一下，构建含特定RNA序列的质粒与含该RNA表达蛋白序列的质粒，在构建过程中，序列选择有何不同。

周末也要努力呀

在构建含特定RNA序列的质粒和含有该RNA表达蛋白序列的质粒的过程中，序列选择有一些不同之处。1. 含特定RNA序列的质粒：在构建含特定RNA序列的质粒时，需要选择一个适合的载体质粒，该质粒应具有适当的启动子和终止子，以确保RNA序列能够被正确转录和翻译。此外，还需要选择一个合适的选择性标记，如抗生素抗性基因，以便在细胞中筛选和维持质粒。2. 含有该RNA表达蛋白序列的质粒：在构建含有该RNA表达

3 回答370 围观

问过氧化氢氧化损伤模型？

春风十里WW

请问楼主用过氧化氢建立氧化损伤模型成功了吗？重复性好吗？

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