实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问确定了miRNA的成熟序列和前体序列，怎么确定miRNA对应的DNA序列在基因组上的位置呢

周末也要努力呀

可以通过以下方法进行：1. 文献检索：通过查阅相关文献，特别是已知的miRNA数据库（如miRBase），可以找到已经报道的miRNA的成熟序列和前体序列。2. 实验验证：通过实验方法，如Northern blotting、RT-PCR、miRNA测序等，可以确定miRNA的成熟序列和前体序列。确定miRNA对应的DNA序列在基因上的位置可以通过以下方法进行：1. 基因组比对：将已知的miRNA序

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问粪便激素测定流程？用乙醇提取后还需要试剂盒吗

周末也要努力呀

粪便激素测定的流程一般包括以下步骤：1. 样品收集：收集患者的粪便样品，并尽量避免污染。2. 样品处理：将收集到的粪便样品进行处理，通常包括样品的稀释、混匀等步骤。3. 提取：使用有机溶剂（如乙醇）对样品进行提取，以提取目标激素。4. 浓缩：将提取得到的溶液进行浓缩，以增加激素的浓度。5. 试剂盒操作：将浓缩后的样品与相应的试剂盒中的试剂进行反应，根据试剂盒的原理，测定激素的浓度。6. 测定结果分

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问检测动物组织中的SOD时，测量蛋白浓度可以选择BCA法吗？

高山云初

测量蛋白浓度可以选择BCA法！

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问L929细胞培养过程中，传了几次代以后出现这样圆圆的

高山云初

很可能是因为细胞消化过度或者老化，导致细胞融合

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问苯酚红的颜色怎么变浅了

秋秋欣欣

颜色变浅是正常现象，后续加入的试剂的影响

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问请问多粘菌素B对大肠杆菌是不是没有纸片扩散法标准？

sswei

使用标准肉汤微量稀释ISO-74 20776作为检测粘杆菌素最低抑制浓度的参考方法。必须使用多粘菌素的硫酸盐；不建议使用琼脂稀释法、纸片扩散法和梯度扩散法。总药物粘菌素的目标平均稳态血浆浓度约为2mg/L，多粘菌素B的目标浓度相似(2至4mg/L)。

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问生物成像操作步骤及方案

秋秋欣欣

1. 将麻醉的小鼠放入成像箱并关门。2. IVIS Acquisition Control Panel 选择成像模式: Luminescent (生物发光)或Fluorescent(荧光)。3. 选择曝光参数，默认值为Auto(注:也可手动调节成像参数，包括ExposureTime 曝光时间，Binning，f/stop 光圈)。4. 勾选Photography，Overlay和Alignment

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问求助SDS-page实验部分条带未显示

高山云初

可能是由于样品中蛋白质浓度太低或者电泳条件不合适导致的。

4 回答581 围观

问请问一下纯化好的鸡源IFITM1蛋白放在-40℃冰箱一直保存着，已经冻融了两次了，还能再用吗，会有影响吗？

sswei

纯化好的鸡源IFITM1蛋白放在-40℃冰箱一直保存着，已经冻融了两次了，还能再用的

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问PFGE实验小片段堆积高亮是什么原因

高山云初

有可能是蛋白污染，再一点是胶孔点样的时候戳孔了

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问两个因素的交互作用除了正交实验还可以用什么啊？

feixue7758527w

我觉得还是可以用交叉分析的，其他也可以用多因素分析的。

3 回答455 围观

问跑蛋白的时候总是出现这种情况，一个孔的样品会漏到下面去，这怎么办？

高山云初

如果是上样过程容易漂出孔道,需考虑两点: 孔道容量到底是多少,加样必须在什么范围内。如果加样量小于孔道容量,不应该有问题你的上样缓冲液是否足够重和粘稠

4 回答492 围观

问索莱宝SOD测活性试剂盒来测试我们纯化出来的蛋白样品，但是要怎么计算它的酶活呀

高山云初

套用公式计算没问题，一般有几个单位足够了

4 回答517 围观

问请问一般常用的JNK抑制剂是用什么呀？用于动物身上文献上查到SP600125 用在细胞上的

高山云初

有D-JNKI-1 (AM-111) 、SU3327 ，SP600125也可用。

4 回答681 围观

问raw264.7细胞由IL-4诱导向M2型极化的方法

周末也要努力呀

可以使用以下方法：1. 培养基准备：使用DMEM（Dulbecco's Modified Eagle Medium）培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素/链霉素。2. 细胞培养：将RAW264.7细胞在培养皿中以37°C、5% CO2的条件下培养至80-90%的密度。3. 细胞处理：将培养皿中的细胞用PBS洗涤一次，然后加入IL-4（10 ng/ml）处理培养基中。将细胞继续培养24-

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问求助问一下这油脂块一样的东西是污染了吗，刚复苏就有，感觉是悬浮的，可以洗掉，貌似也不怎么影响细胞生长，但是养几天就会出现

周末也要努力呀

建议离心时候加PBS多洗几次，更换培养基

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问H2SO4（1+1）是指98%优极纯和水1:1混合是不是没有100%的硫酸

高山云初

100%的硫酸只是理论上的数值

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问两个基因一起做干扰过表达的实验步骤

feixue7758527w

希望对你有用第一步:选择目标基因首先需要选择要过表达的目标基因。这个基因可以是已知的,也可以是未知的。如果是已知的基因,可以通过文献调研或数据库查询来获取该基因的序列信息。如果是未知的基因,可以通过基因组测序等方法来获取该基因的序列信息。第二步:构建表达载体表达载体是将目标基因导入到细胞中的工具。常用的表达载体有质粒、病毒和细胞质注射等。在构建表达载体时,需要将目标基因的序列克隆到载体中,

3 回答1064 围观

问脉动真空灭菌器的选型依据

周末也要努力呀

在贵实验室购买器材平台搜索后按照销量排序，选择价格合适销量高厂家有售后保证的

3 回答372 围观

问wb条带异常，求大神解惑

feixue7758527w

没有目标条带啊，你还是看看抗体的问题，尤其是一抗是不是有问题了

4 回答336 围观

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