实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问各位前辈，想请教下，豚鼠皮肤组织10%中性甲醛固定2个月后，脱水时常该怎么调整呢，谢谢各位

土井挞克树

脱水一半都用乙醇，建议脱水前用pbs漂洗，效果好一些。

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问如何鉴别蛋白质溶液中是否含有某种特定的蛋白质

loveliufudan

有多种方法可以鉴别蛋白质溶液中是否含有某种特定的蛋白质。以下是其中的一些方法：SDS-PAGE：通过将蛋白质进行电泳分离，然后用特异性的抗体探测目标蛋白质。如果特异性的抗体与目标蛋白质结合，则可以在蛋白质条带上观察到信号。免疫沉淀：将蛋白质溶液加入到特异性抗体柱中，如果目标蛋白质与抗体结合，它将被沉淀下来，然后可以用Western blot或其他方法检测到目标蛋白质。ELISA：酶联免疫吸附检测法

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问控制植物某一性状或功能的基因如何筛选？求大概实验计划

huarenqiang5

首先要构建一个群体，如果是植物（特别是作物）还好说点。一般用含有目标基因（表型）的亲本和没有相应性状的标记的亲本的杂交后代构建群体。一般而言，如果是质量遗传的单孟德尔基因，用F2群体就够了。然后筛选大量两亲本间存在差异的标记，包括分子标记和表型标记等下面要在对群体的每一个系（如果是F2群体就是每一个单株）进行全部标记的分析，（PCR扩增电泳，蛋白质电泳等等）。最后把所得所有数据进行

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问WB实验内参出现很多条带

sswei

可能存在以下原因:①细胞传代次数过多会使得蛋白表达不同②体内表达的蛋白样本具有多种修饰形式，如乙酰化、甲基化、烷基化、磷酸化、糖基化等。③蛋白样本降解④可能检测到未经报道的新蛋白或同一蛋白家族中具有相似表位而结构不同的蛋白⑤蛋白样品可能没有充分变性，从而残留多聚体

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问如何去除培养皿中的成纤维细胞(杂细胞)?

dxyc42u

诱导成纤维细胞使其失去贴壁习性，然后去除培养基

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问肠道菌群研究中16srna与16sdna有什么区别？

dxyc42u

16sdna比16srna稳定，不易分解，检测相对简单些

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问复苏了RAW巨噬细胞培养，用15%DMEM，可是长的好慢，没有明显操作失误，马上就要做转染，郁闷啊，求助高手，谢谢！！

huarenqiang5

主要考虑培养条件、培养基、血清、细胞这些是否存在问题。建议从这几方面找问题。

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问求助，三组不同治疗的疗效对比的统计方法？

上山打老虎11111

如果治疗前有方差齐性，治疗后没有了，建议保险起见选择秩和检验

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问ls8细胞用氟化钠处理，这个氟化钠是自己配置的还是找厂商买？如果配置用的水是单蒸水还是双蒸水？

dxyc42u

我们实验室都是找厂商买的，自己配置有点麻烦

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问请问胶乳包被两步法怎么更好的重复出来？

土井挞克树

进行第二步之前建议检测一下ph，进行ph滴定。

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问做一次MST一般需要准备多少蛋白，几微克？

dxyc42u

在蛋白纯度非常高的情况下，用5-12um。

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问悬浮培养的淋巴细胞总是聚团，是不是状态不好？应如何避免？怎样去除死细胞？

sswei

细胞培养瓶内的细胞出现抱团现象，一般可以从以下几个方面分析： 1、消化的过程可能过于粗暴，吹打太用力，消化太久，消化液太强或有毒性等会导致细胞死亡。细胞死亡后会释放出DNA，缠绕其他细胞，形成黏性的细胞团。2、细胞离心速度过大或时间太长，也容易造成细胞抱团。3、消化不完全的时候，细胞和细胞之间的连接没有分开；消化过度的时候，圆形的细胞容易聚堆，再分开很困难。4、状态不好、老化的细胞，也可能会出现抱

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问溴酚蓝形状很奇怪！！！求原因，影响结果吗

loveliufudan

一些可能导致溴酚蓝异常形状的原因包括：溴酚蓝溶液太老或者暴露在光线下过久，导致化学变化。溴酚蓝溶液受到污染，比如说有杂质、异物等。溴酚蓝溶液过浓或过稀，导致出现异常形状。这些异常形状可能会影响您的实验结果，因为溴酚蓝常常被用于测定DNA含量、蛋白质含量等实验中。因此，建议您在使用溴酚蓝之前，仔细检查其外观和清晰度，如果发现异常，最好不要使用，以免影响您的实验结果。

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问请问，phostag检测蛋白磷酸化，该怎么对磷酸化的蛋白水平进行定量呢？是用磷酸化条带/总蛋白条带，还是用磷酸化条带/非磷酸化条？

土井挞克树

都可以，但是实际应用中还是磷酸化/总蛋白条带好一些。

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问总 RNA 中除去基因组 DNA 实验中tris-hcl用的是多少浓度？

huarenqiang5

Tris -hcl 浓度一般为50 mM 。

3 回答440 围观

问96孔板 cck8实验加药方式

huarenqiang5

加药的两种方法： 1.把每一个孔的液体吸出来，再把用培养基配好的药加进去。吸液体的时候，把板子倾斜竖起来70°（方便你看），用200μl的枪调最大量程，套一个200μl枪头再套一个10μl枪头，从孔的最低点把液体吸出来。注意不要一下子把整个板的液体全吸出来，因为你加药前还要每一个浓度都混匀，很费时，最好不要让你的细胞空置太久，一般都是半个板地来。

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问包埋之前的板子有必要洗一下再开始加试剂吗？

土井挞克树

最好洗一下，因为洗一下可以把杂质和污染洗掉

4 回答172 围观

问求助各位老师，3T3-L1脂肪细胞MTT怎么做？用脂肪前细胞和成熟脂肪细胞各做一遍吗？

dxyc42u

脂肪细胞做MTT一般做成熟脂肪细胞就行

3 回答505 围观

问检测培养细胞的HBV复制情况应该检测细胞内的还是培养液中的Hbv

dxyc42u

细胞内和培养液中的Hbv都检查，主要看细胞内的Hbv水平

3 回答361 围观

问离心后清洗沉淀3次用无菌水重悬，请问怎么重悬并用血球计数板计数制成浓度为1×107 cfu·mL-1的悬浮液？

dxyc42u

重悬时用少量无菌水，然后计数，计数完根据需要的浓度算再加入的无菌水即可

3 回答3982 围观

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