实验问答

21,812,293 科研人在看

科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问免疫荧光整个细胞都有荧光，无法辨别目的蛋白的表达，抗体浓度也是按师兄师姐说的，怎么解决？

sswei

原因有二：一是二抗浓度过高，适当降低二抗浓度即可。二是二抗发生沉淀，可以使用过滤戒者离心荧光标记二抗。

5 回答240 围观

问进行免疫荧光染色实验时，动物组织没有固定直接放OCT里了，冰冻切片后需要再固定吗？

sswei

组织不固定直接OCT里，冰冻切片需要再固定。

4 回答1016 围观

问老板要求描述树突的长度和数量，不知道怎么弄？谁能提供一下帮助啊

sswei

树突的总长度可以通过用其所占的体积除以树突的平均横截面积来计算获得。

2 回答304 围观

问想请教一下，对免疫荧光的数据处理是只能处理单通道的荧光强度吗？Merge 之后的图像只是用于直接观察吗？[皱眉R][皱眉R]

huarenqiang5

是的，免疫荧光数据处理必须将2个通道的荧光分割开，获得2张图像。从而处理单通道的荧光强度。如果是多色荧光标记就是多了通道而已，分割方法也是一样的。

3 回答127 围观

问cleaved caspase3蛋白做免疫组化的时候，用什么抗原修复方式最好，破膜比例多少合适？

土井挞克树

一般建议用微波加热修复法推荐的修复液：常用柠檬酸盐缓冲液（pH=6.0）。

2 回答697 围观

问WB实验中总是在目标条带下面还有点细细的小条带，不知道如何去除？留着很丑。此外，目标条带，分析软件哪个更好？

sswei

可以采用以下方法去除小条带:1、更换一抗，换单克隆的。2、不换一抗，降低一抗稀释比，这样目的条带会变弱，不过杂带也会，有时候就可以去掉杂带了。3、多封闭一下。4、洗膜的时候多洗几次。

6 回答384 围观

问进行倾向得分匹配纳入的变量数

loveliufudan

PS评分的构建可以采用多种方法，其中包括logistic回归等。在构建PS评分时，确保有足够的EPV是很重要的，因为EPV越高，对结果的置信度就越高。通常，建议至少每个分组（例如治疗组和对照组）需要有10个事件（例如死亡或复发）才能确保具有足够的EPV。因此，如果病例组和对照组分别有45和93个个体，那么病例组的EPV仅为4.5，而对照组的EPV为9.3。在这种情况下，最好不要使用所有的基线变量来

2 回答225 围观

问co-ip一般都选用哪种裂解液？课题组有RIPA（强），还有自己配的强、中、弱的裂解液，应该选哪种比较合适？

土井挞克树

一般首次使用应该选择中度的裂解液，避免过度裂解和裂解不充分

6 回答4099 围观

问western blot同一批sample出来的条带趋势完全相反，为什么会这样？

huarenqiang5

考虑是转膜时没贴紧导致电流分配不均或显色过程中显色液加得不均匀造成的。

3 回答1139 围观

问southern blot搭桥容易倒，用什么装置比较好？

土井挞克树

可以用木架或者木板代替三折纸，会稳固很多

2 回答331 围观

问TH17细胞体外诱导分化比例过低

土井挞克树

还是需要把电压调回正常的水平，然后可以加入促诱剂

3 回答1152 围观

问制备western blot分离胶后，使用无水乙醇还是纯水进行液封？两者有何不同吗？

土井挞克树

建议使用无水乙醇液封，无水乙醇对分离胶影响小

4 回答2175 围观

问免疫组化总是会脱片，是什么原因啊？

土井挞克树

脱水时间是否太长，减少脱水的时间，考虑存在过度脱水。

4 回答1342 围观

问免疫组化结果图很黄，几乎看不到蓝色

土井挞克树

先把ph检查一下，ph不合适就会染不上

3 回答1105 围观

问我对鱼的肠道染色，遇到苏木精的蓝色可以染上，0.5%伊红的红色完全染不上去，可能是哪步出了问题呢？

loveliufudan

对于鱼的肠道染色遇到苏木精的蓝色，但是无法染上0.5%伊红的红色，可能有以下几个原因：染色时间不够：染色时间不够可能会导致染色不均匀或者染色效果不佳，因此可以尝试延长染色时间。染色温度过低：温度过低可能会影响染色效果，因此可以尝试将温度调高一些。pH 值不合适：染色 pH 值不合适也会影响染色效果，因此可以尝试调整 pH 值。组织固定过度：固定过度可能会导致细胞膜破裂，染色剂不能进入细胞内部，从而

3 回答436 围观

问做免疫组化实验组织标本固定时间多久合适？

sswei

免疫组化实验组织标本固定时间一般在24一48小时。

3 回答2021 围观

问免疫组化实验组织脱水、浸蜡不充分会导致什么结果？

sswei

如果组织脱水、浸蜡不充分，蜡块会出现组织收缩凹陷，而且在免疫组化热抗原修复操作时会容易脱片。

3 回答961 围观

问酶联免疫吸附法可以提纯(99%)污泥中除磷相关酶ppk和ppx吗

土井挞克树

酶联免疫吸附法可以提纯(99%)污泥中除磷相关酶ppk和ppx，但是可能需要多次吸附和提纯

3 回答282 围观

问Elisa结果不是特别好，老板让做elispot.有详细的步骤么有大佬做过么，要注意什么

huarenqiang5

直接间接法刺激方法：建议用PMA和娄诺霉素刺激PBMC，使其产生IFNγ。在培养液中稀释PBMC，其中含1ng/ml PMA和500ng/ml娄诺霉素（Sigma, Saint Louis, MO）。加5X104至3x105个细胞到抗体包被的PVDF孔，孵育箱中孵育10-15小时。其它的刺激剂孵育时间可能不同，基于细胞因子生成细胞的量，按不同情况作最佳选择。操作过程1. 用50ul 70%酒精孵育

3 回答360 围观

问转投状态怎么看

dxy_oysk2ye9

一样的情况，是不是要等编辑那边发邮件？

4 回答548 围观

关于丁香通

公司信息

个人用户

企业机构

无忧采购轻松科研

提问

扫一扫

实验小助手

扫码领资料

反馈

TOP

打开小程序