实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问网状meta漏斗图这样怎么办？用的stata，求教怎么解决

百泰派克-李工

同问，有哪位大佬解决了这个问题吗？

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问提取黄酮含量怎么测定?

凌晨三点Dxy

植物提取黄酮含量的测定方法有多种，其中常用的有酸水解法、紫外分光光度法和高效液相色谱法。酸水解法是将黄酮骨架中的糖部分裂解，然后用紫外光谱法或高效液相色谱法等方法测定莽草中黄酮类的总含量。此方法会破坏一部分黄酮类化合物的结构，并需要大量的试剂和时间。紫外分光光度法是以总黄酮类物质的测定为例，吸取一定量的样品溶液，置于比色管中，用乙醇溶液补充至一定体积，加入一定量的亚硝酸钠溶液，放置一段时间后，加入

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问家人们，谁知道收集的大肠杆菌后发青色是怎么回事？

百泰派克-李工

同问，我也遇到了这种情况，求大佬解答

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问激光扫描共聚焦显微镜的操作方法

凌晨三点Dxy

激光扫描共聚焦显微镜的操作方法如下：打开电脑，运行ZEN软件。点击“start system”，等待硬件自检结束。点击“acquisition”，选择“standby”，等待激光器预热。等“status”显示ready后开启激光器。双手握紧物镜上部，轻轻缓慢抬起镜头。把物镜调为63X Oil（细胞），40X Oil（组织）。把油滴一滴到目镜上。看两个样品加一滴油，如果脏了要用清洗液清洗，并擦干净。

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问p62蛋白两条带可以用嘛？是p62蛋白被修饰了吗？

百泰派克-李工

当Western Blot分析中观察到p62蛋白出现两条带时，这可能表示p62蛋白发生了一种或多种形式的翻译后修饰。第一种情况：P2蛋白发生了翻译后修饰p62蛋白可能经历了磷酸化、泛素化、糖基化等翻译后修饰，这些修饰可以改变蛋白质的迁移率，导致电泳时出现多个条带。例如，磷酸化会使蛋白质带负电，从而改变其在凝胶中的迁移。第二种情况：P2蛋白降解了如果p62蛋白部分降解，可能会产生较小的片段，这些片段

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问转膜以后没封闭，pvdf膜存4℃冰箱前没晾干有啥后果？

百泰派克-李工

将PVDF膜（聚偏氟乙烯）转膜后直接放入4℃的冰箱而不进行晾干，可能会带来几个潜在的问题：1.水分残留：如果膜上有水分残留，低温条件可能导致水分凝结，这可能会影响膜的物理结构和性能。2.膜结构改变：PVDF膜在潮湿条件下可能发生结构上的改变，这可能会影响其后续的应用效果，如过滤或分离性能。3.微生物生长：虽然低温条件能抑制大多数微生物的生长，但长时间存放可能会促进耐寒微生物的生长，尤其是如果膜上有

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问做WB时，小kd的条带跑出来是倒u型弯曲，稍大些kd的是正常的，为什么呢，是胶没配好，还是电泳夹子是漏的？

百泰派克-李工

在蛋白质凝胶电泳（Western Blot, WB）中，如果小分子量（小kd）的蛋白条带出现倒U型弯曲，而较大分子量（大kd）的蛋白则正常，这可能是由几个因素引起的：1.凝胶问题：如果凝胶制备不均匀或者在聚合过程中发生了问题，可能会导致蛋白质在电泳过程中不均匀迁移。比如，凝胶中的交联密度不均匀可能会导致小分子量蛋白质在电泳过程中发生变形。2.样品过载：如果样品量太多，尤其是小分子量的蛋白质，可能会

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问请问免疫共沉淀Co-IP后能够做定量比较吗？

百泰派克-李工

免疫共沉淀（Co-IP）实验后通常不适合直接用于定量比较，因为此技术主要用于检测蛋白质间的相互作用，而不是蛋白质的表达量。Co-IP更多地被视为一种定性方法，用于确认蛋白质之间是否存在相互作用。如果需要进行定量比较，可以考虑使用免疫印迹（Western Blot）等其他方法来补充Co-IP实验的结果。免疫印迹能提供更精确的蛋白质定量信息。然而，即使使用这些方法，也需要注意样本处理、蛋白质载量和检测

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问求问WB 的目的蛋白分子量160kDa，转膜条件怎么设定

百泰派克-李工

在进行Western Blot（WB）分析时，如果目标蛋白的分子量为160 kDa，转膜条件应该注意以下几点：1.膜材料：对于大分子蛋白（如160 kDa），通常推荐使用PVDF（聚偏氟乙烯）膜，因为它具有更高的蛋白结合能力。2.转膜缓冲液：使用含有适量甲醇的转膜缓冲液。甲醇有助于蛋白质更好地结合到PVDF膜上，但过多的甲醇可能会导致蛋白质过度聚集，影响转移效果。通常，缓冲液中甲醇的比例为10-2

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问用sephadex g-100纯化蛋白柱子很堵，流速极其慢，请问怎么解决？

百泰派克-李工

使用Sephadex G-100纯化蛋白时，如果遇到柱子堵塞和流速极其慢的问题，可以尝试以下几种方法来解决：1.检查柱子的装填：确保Sephadex G-100介质在装填时均匀且没有空气泡。如果存在空气泡或装填不均，柱子的流动性会受到影响。2.调整样品的体积和浓度：如果样品的体积过大或者浓度过高，会导致柱子堵塞。尝试减少样品的加载量或者稀释样品。3.提高缓冲液的强度：有时候增加缓冲液的强度可以帮助

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问WB实验中，GAPDH正常，阳参也正常，就是样品组目的条带不出来是什么原因引起的，有没有大佬有过类似的问题

百泰派克-李工

如果出现以上情况可能有以下几种原因：1.目的蛋白的表达水平低：如果样品中目的蛋白的含量非常低，可能无法被检测到。这可能是由于样品的本质特性或样品处理过程中蛋白丢失引起的。2.抗体特异性问题：使用的一抗或二抗可能对目的蛋白的识别能力不足。确保抗体的特异性和活性。如果可能，尝试更换抗体。3.样品制备问题：样品在制备过程中可能发生了蛋白降解或损失。检查样品制备过程中是否有可能导致蛋白降解的步骤，如样品是

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问WB结果分子量增加了20kDa,怎么去磷酸化、去糖基化来验证翻译后的修饰

百泰派克-李工

Western Blot（WB）实验中，若观察到某蛋白的分子量相比预期增加了20kDa，这可能表明该蛋白经历了翻译后修饰。为了验证这一点，你可以采取以下步骤：一、去磷酸化验证1.样品准备：首先，确保你有足够的蛋白样品。2.选择适当的磷酸酶：通常使用碱性磷酸酶（如Lambdaprotein phosphatase）或其它专门的去磷酸化酶。3.进行磷酸酶处理：根据酶的说明书进行操作，通常是在特定的缓冲

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问WB实验我需要有什么准备?

百泰派克-李工

在进行Western Blot（WB）实验之前，有几个关键准备工作需要完成：一、实验设计:二、样品准备:三、电泳准备:四、转膜准备:五、膜阻断和抗体孵育:六、检测:七、其他材料和设备:八、实验记录和数据分析:在进行WB实验之前，建议仔细阅读相关的操作手册，如果有必要，可以先进行小规模的预实验来优化条件。对于实验中可能出现的问题，准备一些排错策略也是非常有帮助的。

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问请问怎么用高效液相识别水体中蓝绿藻的演替呀

百泰派克-李工

蓝绿藻演替主要是指不同种类蓝绿藻在水体中的优势地位随环境变化而发生的变化。使用HPLC进行此类研究的一般步骤如下：1.样品采集：2.样品处理：3.色谱分析：4.检测：5.数据分析：二、注意事项1.色素稳定性：2.色谱条件优化：3.标准品对照：4.重复性和准确性：

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问怎么验证两蛋白内源性相互作用啊

百泰派克-李工

验证两个蛋白之间的内源性相互作用可以通过多种生物化学和细胞生物学方法：1.免疫共沉淀（Co-Immunoprecipitation, Co-IP）:这是一种常用的方法，通过使用针对一个蛋白质的特异性抗体来捕获该蛋白质及其可能的相互作用伙伴。如果另一个蛋白质也被沉淀下来，这表明两者之间可能存在相互作用。图12.亲和素纯化质谱（Affinity Purification-Mass Spectromet

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问sumo融合蛋白为什么在镍柱上柱上酶切切不掉标签？

百泰派克-李工

这种情况可能由几个因素引起：1.酶的活性不足：使用的酶可能活性不高，或者已经失活。酶的活性可以受到多种因素影响，包括储存条件、温度、pH值等。建议检查酶的质量和储存条件，或者尝试使用新鲜的酶。2.酶的浓度不足：可能酶的添加量不足，无法充分与蛋白接触或者达到足够的酶切效率。增加酶的浓度可能有助于改善切割效率。3.不适宜的酶切条件：酶的切割效率可能受到反应条件的影响，如pH值、盐浓度、温度等。需要优化

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问ip 实验求助！input组目的蛋白为双条带，ip组拉下来是单条带！

百泰派克-李工

在免疫沉淀（Immunoprecipitation, IP）实验中，如果在input（输入）组中观察到目标蛋白为双条带，而在IP组中只拉下单条带，可能是由于：1、蛋白修饰：在Input组中，目的蛋白可能存在不同的翻译后修饰形式（如磷酸化、糖基化等），导致电泳迁移速度不同，形成双条带。而在IP组中，可能只有一种形式的蛋白被特异性抗体识别并沉淀下来。2、蛋白降解：在Input组中，双条带可能是由于蛋白

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问如何根据图谱看蛋白大小

百泰派克-李工

在进行SDS-PAGE时，通常会在凝胶的一侧跑一个分子量标准（Molecular Weight Marker），这是一系列已知分子量的蛋白质。这些标准蛋白质在电泳后会形成一系列条带，每个条带对应一个特定的分子量。将样品和分子量标准一起进行SDS-PAGE电泳，电泳结束后，观察样品在凝胶上的迁移位置，并与旁边的分子量标准比较。根据样品蛋白条带与分子量标准条带的相对位置，可以推断出样品蛋白的大致分子量

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问为什么有些蛋白在肿瘤组织中高表达却在血液中低表达或检测不到？

百泰派克-李工

蛋白质在肿瘤组织中高表达而在血液中低表达或检测不到的现象可能由多种因素引起：1.组织特异性表达：有些蛋白质可能在特定组织中高表达，如肿瘤组织，但在血液中的表达水平较低。这是由于蛋白质的生物学功能和表达调控机制决定的。2.血液稀释效应：即使肿瘤细胞产生大量的特定蛋白质，这些蛋白质释放到血液中后，由于血液体积庞大，可能被大幅稀释，从而难以检测。3.蛋白质降解：血液中的酶系统可能会迅速降解某些蛋白质，使

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问用一定浓度的乙醇回流提取样品时，过滤浓缩好是进行冻干再上液相测量好，还是旋转浓缩好直接上液相测量好？

百泰派克-李工

在使用一定浓度的乙醇进行样品提取后，接下来如何处理样品以进行液相色谱（HPLC）测量，通常取决于样品的性质和实验的具体要求。这里有两种常见的方法：冻干和旋转蒸发（旋转浓缩），每种都有其优势和局限性。一、冻干：1.优势：冻干可以非常有效地去除所有溶剂，特别适用于热敏感物质。这种方法不会导致热降解，适合对热不稳定化合物的处理。2.局限性：冻干过程较慢，需要更多的时间。对于一些不易重溶的样品，冻干可能导

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