实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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问PCR扩增10微升可以25微升无条带是为什么?

土井挞克树

上样量太大以后，会加重pcr负荷，导致失败

3 回答818 围观

问做韭菜叶片的石蜡切片在脱蜡复水过程中出现了脱离玻片是因为什么啊？

土井挞克树

脱片是因为脱水过度了，减少脱水时间。

3 回答440 围观

问基因过表达后，相关的表型结果，过表达株比空载株高，二者有统计学差异。但未到野生株水平，这个应该怎么解释呢？

loveliufudan

基因过表达可以导致表型的变化，但是基因表达水平的高低并不是唯一影响表型的因素，还可能受到其他基因、环境和遗传背景等因素的影响。因此，即使基因过表达株比空载株表现出显著的表型差异，也不一定能够达到野生型的表型水平。这种现象可以通过以下几种方式来解释：基因过表达只是表型变化的一部分：在自然界中，很少有单个基因能够完全控制某个表型的发生，表型通常受到多个基因的影响。因此，即使某个基因过表达，也不能保证该

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问从细胞中提取外泌体的实验，一般需要养多少细胞再进行提取分离比较合适

土井挞克树

一般需要养10x7左右的细胞再分离提取

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问悬浮细胞转染

土井挞克树

可能是存在样本降解出了这一个条带，或者其他杂质污染了。

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问抗体动态性研究

土井挞克树

最有效的是质谱法和免疫印迹，可以区分不同抗体的动态性差异

3 回答325 围观

问RIPA提蛋白！

土井挞克树

一般不会改变蛋白结构，但是在提取过程中理化性质改变也会引起蛋白降解

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问活化的caspase3切割完底物后自身会降解吗

土井挞克树

会被降解，但是一般建议外部添加，可以干净消耗。

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问求助！！！请问各位大神多发性骨髓瘤细胞都是怎么养的！！

龙大人驾到

多发性骨髓瘤细胞培养需要选择合适的培养基，如人多发性骨髓瘤细胞专用培养基。一般来说，15%的血清对于多发性骨髓瘤细胞的生长可能不够，建议使用20%的血清。MM1S和8226细胞株都是悬浮生长的细胞，传代时需要注意细胞密度和离心条件。

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问血清TG

土井挞克树

先检查模型是否造模成功，然后调整药量做三次，看结果差异

3 回答378 围观

问小鼠垫料

sswei

按一只笼子100g左右的比例放。

3 回答1632 围观

问生物学转录组测序请教

土井挞克树

只能根据生鱼片的图形去找可变剪接符合大的那个转录组，如果想要确定必须要测序。

3 回答489 围观

问慢病毒转导之后传代问题

sswei

首先，确定病毒是否有支原体或细菌污染；其次，确定病毒感染MOI是否过高，梯度稀释后感染，寻找合适的MOI。同时考虑目的细胞可能比较敏感，更换其它细胞感染确定病毒是否有问题。病毒对某些敏感细胞有毒性可能是不可避免的。如果以上都排除后细胞状态仍然不好，尝试增加血清含量，观察细胞状态是否好转。

3 回答438 围观

问做qPCR时阴性对照水中一直有扩增子是怎么回事

loveliufudan

有几种可能的原因：污染：可能存在污染，即DNA或RNA在实验室环境中存在，进入了试剂或反应体系中。这种情况可能是由于实验室的DNA或RNA污染引起的，或者可能是由于PCR试剂或其他反应组分中存在的污染引起的。在这种情况下，应该检查实验室中所有试剂和反应组分，以查找可能的污染源。假阳性：假阳性是指在PCR反应中出现了扩增信号，但实际上并不存在目标分子。这种情况可能是由于反应物的特异性问题引起的。在这

5 回答645 围观

问求问大神角膜上皮细胞怎么提取，培养？

土井挞克树

培养基：无血清角质形成细胞培养液，添加0.15mmol/L 钙、0.1ng/ml 人上皮生长因子、5mg/ml 胰岛素、0.5mg/ml 氢化可的松和30mg/ml 牛垂体提取物；MEM；PBSA；胎牛血清

3 回答543 围观

问降解TLR4实验所用的LPS刺激时长大家都是多久？然后孵育PROTAC时长又是多久？

土井挞克树

lps一般的刺激时长为3-5h。

3 回答1379 围观

问 Graphpad prism 比较两组数据（两个样本）之间的显著性差异怎么比，wb条带明显有差异，但为什么试了一下没有差异性

菊与刀刀

显著性差异要有样本平均值才能比，每组一个样本比不了

4 回答4061 围观

问WB蛋白在37到45范围内用哪个浓度的分离胶分离比较合适?

你猜猜乌鸦座

一般蛋白分子量在20-60kDa之间选12%的分离胶

6 回答1417 围观

问感受态细胞转化时，热激时间可以引导入的DNA大小进行调整么？还是在60秒到90秒就可以

龙大人驾到

感受态细胞转化时，热冲击的时间是非常重要的，它能影响DNA片段的渗透和稳定性，从而影响到细胞转化效率。一般来说，热冲击的时间应该在60秒至90秒之间。这个时间范围内，热冲击可以促进DNA片段的进入细胞，但如果时间过久，则有可能导致DNA片段的降解和稳定性下降，从而对细胞转化效率造成不良影响。此外，DNA的大小也会影响细胞转化效率，较小的DNA片段通常比较容易进入细胞并被稳定地表达。因此，在进行感受

6 回答2605 围观

问WB实验做出来pERK比ERK高，且两者水平变化相一致，内参是齐的，是什么原因呢

土井挞克树

因为pERK的抗体结合力特别高，totalERK的结合力很低。

4 回答710 围观

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