实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问高效液相色谱等度能出峰，梯度没峰的原因，是混合比例阀的问题吗，需要怎么排查?

土井挞克树

可以取一组已知比例的样品，然后加样验证，如果条带不佳可能是比例阀的问题

4 回答410 围观

问细胞状态良好，细胞培养液澄清透明，细胞是前一天传代到新的T175平中，次日观察细胞出现不明物，请问这个是啥啊，是污染么？

土井挞克树

看着像是毛絮污染，可以继续观察。

4 回答300 围观

问做coip时候，ip后目的条带比input的条带高怎么解决。

土井挞克树

1、排除IP条带不是IgG的重链和轻链。2、排除一抗或者二抗没有污染，一般用新配的抗体理论上说IP的条带要和Input的一样。3、把核酸消解就会变正常。

4 回答1379 围观

问3D培养类器官所需的48孔板是有专用的吗？

huarenqiang5

是的，3D培养类器官所需的48孔板有专用的。

3 回答400 围观

问如果一个样品的浓度很低，我可以取同组多只样本一起进行提取吗？

土井挞克树

可以的，一起提取提高提取量。或者分开提取后混合

3 回答279 围观

问能提取血小板后检测血小板- CD40L吗？

土井挞克树

检测CD40L需要活化的血小板才可以，需要通过流式检测，而且流式是目前最成熟的，你选用别的方法不容易被审稿人认可

4 回答449 围观

问血管平滑肌细胞表型转换时一定有PDGF改变吗

龙大人驾到

不一定。虽然PDGF、TGFb、VEGF、FGF等因子是常见的调节因子，可以诱导血管平滑肌细胞的表型转换，但并不意味着这些因子是唯一的调节因子。如果平滑肌细胞通过别的因子导致了表型转换，这些调节因子未必会发生改变。此外，血管平滑肌细胞表型转换是一个复杂的过程，可能涉及多个信号通路和调节因子的相互作用，因此需要具体情况具体分析。

3 回答422 围观

问请问这个破骨细胞诱导成功了吗？

sswei

诱导成功的破骨细胞为可见单个核细胞融合成多核细胞，TRAP染色可见多数细胞胞浆呈酒红色。因该镜下呈酒红色胞浆的细胞数太少，所以诱导欠成功。

3 回答412 围观

问求助啊，为什么DNA条带跑不出来

土井挞克树

可能是dna太大了，与胶的浓度不符，所以没有跑出来

3 回答4767 围观

问同一条基因，一样的引物、模板、酶，在同一台pcr仪跑，但是结果如图，之前跑的比较好，今天跑的就很差强人意。

weiran0928

第二天跑的胶图下方引物二聚体明显增多，可能是引物出现了污染或降解，建议更换新的引物，可以用送的引物干粉，加入一定量dd H2O重悬即可，引物管上有说明的。

4 回答368 围观

问蛋白互作-免疫共沉淀

sswei

蛋白质-蛋白质相互作用是指两个或两个以上的蛋白质分子通过非共价键形成蛋白质复合体的过程。蛋白质与蛋白质之间的相互作用构成了细胞生化反应网络的一个主要组成部分，对调控细胞及其信号有重要意义。蛋白质互作研究按照实验目的可分为两大类，一是验证两个蛋白是否存在相互作用，二是筛选某个兴趣蛋白的互作蛋白。据此是可以通过共价键形成ABC蛋白。

3 回答195 围观

问LPS诱导上皮细胞炎症

龙大人驾到

关于第一个问题，炎症并非只有肿瘤细胞才会发生迁移，一些炎症细胞也可以通过迁移到达炎症部位并发挥作用。此外，炎症过程中细胞增殖和迁移都可能发生改变，因此同时检测细胞增殖和迁移可以更全面地了解炎症过程对细胞的影响。至于为什么没有做凋亡数据，可能是因为凋亡和增殖、迁移不同，需要更复杂的实验设计和分析方法，而且炎症本身就已经是一个复杂的过程，可能没有必要同时考虑所有方面。关于第二个问题，MAPK通路和防御

3 回答790 围观

问求助大鼠心力衰竭模型

龙大人驾到

大鼠给予异丙肾上腺素后发生死亡的可能原因有很多，以下是一些可能的因素：1. 给药方法不当：异丙肾上腺素的给药方法和剂量应该根据实验需要和动物体重进行调整。一般来说，异丙肾上腺素的给药可以通过静脉注射、皮下注射等方式进行。此外，给药前应该进行适当的麻醉和镇静，避免动物产生压力反应导致死亡。2. 异丙肾上腺素浓度过高：如果异丙肾上腺素的浓度过高，会导致血压升高、心跳加快等反应，严重时可能导致心律失常、

4 回答379 围观

问硫酸铵沉淀

weiran0928

看样子可能是盐浓度过高导致的。这里的80%是指饱和硫酸铵的80%浓度吗，也就是终浓度3.2M？这个浓度是比较高的，建议做个硫酸铵沉淀的浓度梯度，用更小的浓度沉淀更好。一般来说，50%以上差不多就够了。要么就减少上样量。

3 回答722 围观

问ZIF8负载核酸

sswei

可能提取质粒的过程中混入了染色体进去。

3 回答460 围观

问Hek-293细胞求助

相似又互补

你这个很大程度是细胞培养的环境变差了，你可以打扫一下细胞间，清理一下培养箱。

4 回答606 围观

问胞膜GABA受体染色

龙大人驾到

要观察GABA受体在胞浆和胞膜的分布，可以尝试以下几种实验设计：1. 免疫荧光染色：使用特异性的抗体标记GABA受体，在细胞水平下观察GABA受体在胞浆和胞膜的分布情况。可以使用荧光探针或荧光标记的抗体等方法进行检测。通过共聚焦显微镜等技术观察荧光信号的分布情况。2. 膜蛋白分离：使用细胞膜蛋白分离试剂盒等方法，将胞膜和胞浆分离。然后使用Western blot或免疫印迹等技术检测GABA受体在胞

4 回答533 围观

问3T3细胞诱导：如图镜下有葡萄串脂滴，是诱导成功？为什么文献里的图（1）细胞间距那么大，我的细胞间距都贴在一起（2）？

sswei

镜下有葡萄串脂滴说明诱导成功。也可以用油红O染色法鉴定细胞是否诱导成功。

3 回答908 围观

问RAW264.7用LPS造模，时而成功时而失败，找不到原因，细胞都没有问题，大家都是怎么操作的呀

dxy_7wd5i4x0

1.lps质量问题，看有没有过期？2.浓度梯度摸索，以及孵育的时长，像我目前孵育浓度最高1.5微克每毫升，孵育时长最高24h3.比较重要的一点，因为lps刺激raw264.7促进细胞极化，所以细胞培养过程中我选择不用胰酶消化，直接预冷pbs浸泡，细胞刮刀去刮落细胞传代

5 回答7841 围观

问chamot的RANKL,100ng/ml,100×，TRAP染色后就这样，不知道有没有成功呀？

dxy_b0h9si93

检测一下染料配制时是不是溶解不充分

3 回答465 围观

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