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科研学霸天团,48小时有问必答
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问
灭活疫苗如何有效快速破乳,以提取其中抗原的核酸,比如水包油包水的猪圆环病毒2型灭活苗,做了几次尝试,加甲醇,氯仿等都没提取出来
sswei
破乳的六种方法如下:1、长时间静置:将乳浊液放置过夜,一般可分离成澄清的两层。2、水平旋转摇动分液漏斗:当两液层由于乳化而形成界面不清时,可将分渡漏斗在水平方向上缓慢地旋转摇动,这样可以消除界面处的“泡沫”。促进分层。3、用滤纸过滤对于电于有树脂状:粘液状悬淫物存在而引起的乳化现象,可将分液漏斗史的物料,甩质地蜜致的滤纸进行减压过滤,过滤后物料则容易分层和分离。4、加乙醚:比重接近I的溶剂,在萃取
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问
请问跑Qpcr时,内参基因跑不齐,但是目的基因可以跑齐是什么原因呢?
loveliufudan
如果内参基因在不同样品中跑不齐,但目的基因可以跑齐,可能是由于以下原因:内参基因在所研究的生物学过程中会发生变化,导致其表达量在不同样品中存在差异。而目的基因的表达则受到其他因素的影响,与内参基因的变化不一定一致。实验操作中可能存在技术误差,例如RNA提取和反转录的效率、PCR反应的稳定性等,这些因素也可能导致内参基因的表达量存在差异,从而影响QPCR结果的准确性。在这种情况下,建议重新选择一个稳
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问
hank’s溶液,原液a一份和原液b,双蒸水18份。这个份是什么意思???
沫子大大
就是如果你配20 ml,就是原液a,b各1ml,水18ml。是指比例的意思。
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问
求助大佬们呀
sswei
细胞密度过大,细胞间相互挤压变形。细胞培养用的试剂PH不适合细胞生长,例如偏酸或者偏碱等情况。
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问
pcr产物大小不对,且非目标条带比目标条带亮,引物是直接用的外文文献里面的
z流沙z
这都是非特异性的条带。如果有目的条带还行,可以升高退火温度以减少非特异性条带。但如果都没有目的条带,引物基本不行了。虽然是参照文献,但也不一定好用,应该去ncbi上面blast一下以保证引物的特异性。
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问
如何进行厌氧菌的平板计数?
z流沙z
主要是要注意保证提供一个无氧环境
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问
求助求助
z流沙z
可以进行,设置好分组,比如两个单独使用,两个联合使用,以及相应的对照
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问
PCR跑胶目的片段大小不对
z流沙z
一般就是非特异性的条带,设计完引物后应在ncbi上面blast一下,确保引物的特异性
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问
流感病毒TCID50测定
z流沙z
可以考虑用2%FBS的培养基稀释后加入细胞中,培养72h左右,减少血清对病毒的影响
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问
请问我的细胞这是污染了吗
PanoV13
不是污染,细胞分裂生长会这个样子
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问
做WB显影时,有背景色是为什么,跟二维码一样。
balalaLy
可能是蛋白表达本来就比较低,另外tbst洗的次数太多了,建议提高tbst中土温的浓度,减少洗的次数
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问
有人做LCR扩增吗?请教~
z流沙z
首先配制琼脂糖凝胶的时候要充分煮沸和混匀,然后跑胶的时候电压不要太高,100-120v电泳20-30min差不多了
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问
trizol提取RNA空白为啥有沉淀
z流沙z
如果空白是指没有样品的话,那就是试剂或者管子带有杂质了
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问
GSDMD蛋白
z流沙z
RAW264.7本身是不表达炎性体成分ASC的,可能不适合于检测下游的GASDMIND
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问
细胞污染
晴空a
看情况应该是污染了,内容物有些混杂不清。
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问
人组织免疫荧光老是有很多非特异性絮状怎么回事
sswei
可能存在有以下几种情况:(1)一部分荧光素未与蛋白质结合,形成了聚合物和衍化物,而不能被透析除去。(2)抗体以外的血清蛋白与荧光素结合形成荧光素脲蛋白,可与组织成分结合。(3)除去检查的抗原以外,组织中还可能存在类属抗原(如Forssman氏抗原),可与组织中特异性抗原以外之之相应抗体结合。(4)从组织中难于提纯抗原性物质,所以制备的免疫血清中往往混杂一些抗其他组织成分的抗体,以致容易混淆。(5)
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问
提取核酸
z流沙z
可能是样品来源本身带有的,提取核酸的时候纯度不够而夹带的杂质,可以进一步纯化一下
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问
4%多聚甲醛固定组织5天还能染免疫组化吗?
z流沙z
可以做出来的,保存样品的时候很多一直放在里面
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问
关于4T1小鼠成瘤问题
balalaLy
小鼠成瘤实验一般不建议反复注射,即使是一次不成功也要等一段时间确保前一次注射失败不会再长,不然会影响成瘤时间和大小的计算。
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问
什么是适配蛋白adaptor?什么是一型跨膜蛋白?怎么定义?
sswei
跨膜蛋白是嵌入细胞膜磷脂双分子层中实现细胞内外跨越的一类蛋白,跨膜区域的相互作用是连接膜外环境与细胞内环境的重要渠道,以此来执行各种激活和应答反应实现信号转导,调控细胞内外的形态和功能上的改变。I型:肽链N端位于胞外C端位于胞内。
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