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        gst蛋白纯化实验求助

        相关实验:GST 融合蛋白沉降实验

        user-title

        DyzNMM2

        图片描述求大佬帮忙分析  使用293t细胞表达ulk2蛋白,转染pcDNA3.1—gst蛋白48h后裂解细胞纯化,产物条带大小只有26kda左右,这说明细胞只表达了标签出来吗?需要如何调整实验呢。。。

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        3 个回答

        user-title

        z流沙z

        有帮助

        如果是转染293t这种真核细胞,建议亚克隆构建HA、MYC、FLAG等小标签,转染24h内即可检测表达

        user-title

        DyzNMM2user-title

        谢谢老师 请问收集体外pull down实验所需的蛋白(50微克)大概需要用多少293t细胞?

        user-title

        z流沙z

        可以先尝试一下10cm培养皿长到80-90%的293t进行转染

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        延长细胞的诱导时间,目前看诱导时间太短

        user-title

        DyzNMM2user-title

        谢谢老师,请问表达时间一般可延长至多久?中间可以给细胞换液吗

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        这可能意味着在您的实验中,ULK2-GST融合蛋白仅被部分表达或未被表达。

        以下是一些可能导致这种情况的原因:

        转染效率不够高:您可以尝试优化转染条件,例如优化细胞密度、改变转染试剂、调整转染时间等,以提高转染效率。

        表达的时间过短:您可以延长表达时间,以便更多的蛋白质被表达和积累。

        蛋白质不稳定:ULK2蛋白可能在细胞内不稳定,您可以尝试添加蛋白酶抑制剂或减少裂解的时间来避免蛋白质的降解。

        融合标签可能影响蛋白稳定性或折叠状态:GST标签可能会影响蛋白的稳定性和折叠状态,您可以尝试使用其他的标签或删除标签进行表达。

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