实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问请问大家EPS的提取方法及操作？

sswei

目前常见的物理提取方法有高速离心、超声波和热提取等,化学方法有NaOH提取、乙二胺四乙酸（EDTA）提取、阳离子交换树脂提取（ＣＥＲ）、甲醛提取、戊二醛提取以及一些不同化学试剂的组合提取甲醛－氢氧化钠法、甲醛－超声等方法。

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问小组织从-80拿出来没放到液氮，多久rna会降解，1-2min会不会都降解完

balalaLy

1，2min不至于，有些组织需要研磨或者超声的起码都要半个小时以上的也没那么快降解

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问小鼠注射完水杨酸钠隔两个小时再注射水合氯醛为什么会死？

sswei

可能注射后进入小鼠体内液体量大了所引起。

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问请问有没有做磷酸化比较多的，帮忙看一下这个算不算是磷酸化阳性结果

z流沙z

磷酸化在普通凝胶上能跑出来变化，建议下面那个可以减少上样量更为明显

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问质粒转入DE3感受态细胞中菌液PCR总是没有条带？

loveliufudan

可能有以下几种原因：质粒转化效率低：转化的效率低可能导致在菌落PCR检测中出现假阴性结果。您可以尝试重新制备感受态细胞，注意细胞的生长状态和转化的时间等因素，确保转化效率足够高。质粒没有正确复制：感受态细胞内的大肠杆菌染色体和质粒的DNA竞争复制的情况下，质粒可能无法正常复制，导致质粒的拷贝数不足，PCR检测不出条带。您可以尝试使用一些复制更高效的质粒或增加抗生素筛选压力来提高质粒的复制数。PCR

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问小鼠细胞的敲降慢病毒可以能用到大鼠细胞吗？

z流沙z

应该是不行，除非靶向的序列刚好一致性很高

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问nih3t3嘌呤筛选浓度

z流沙z

puro浓度还是需要再稍微摸索一下，跟细胞状态有关。MOI也需要摸索一下，取决于病毒包装的效果

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问急急急！！透射电镜取完材忘记放4度了，还能用吗？

sswei

温度太高镜筒里的碳氢化合物将易挥发影响真空度,同时也容易污染样品。

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问腹腔注射

z流沙z

应该是插入腹腔了，可以注射点空气或者pbs

4 回答707 围观

问细胞保种

z流沙z

还行，正常培养，不需要特殊的培养基

3 回答464 围观

问中华糖尿病杂志

sswei

审稿三个月内定初步录用后，一般再三个月定稿。

3 回答322 围观

问样本量post-hoc power

loveliufudan

这句话的意思是，卡方检验不能用于确定样本量的大小是否适当。这是因为卡方检验是一种统计方法，其目的是评估观察到的数据与预期数据之间的差异，从而确定变量之间的关系是否显著。在进行卡方检验时，样本大小通常是固定的，而不是根据检验的需求来确定。样本量的大小通常是在研究设计的初期根据研究目的、统计学假设、效应大小、显著性水平和统计功效等因素进行计算的。而对于已有数据的分析，可以根据样本量和效应大小等指标计算

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问中文论文标点符号问题

z流沙z

是的，建议参考文献使用软件插入

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问WB最近遇到了好多问题，求帮助！

z流沙z

1、配胶要充分混匀，没有杂质，样品要离心取上清，不要混有颗粒状物质或者细胞沉淀。2-3、小分子蛋白可以配高浓度如15%的胶，减少电泳和转膜时间，比如电泳80v 30min和120v 至分开即可，像你蛋白这么小的转膜200mA 1h完全足够

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问microRNA 实时定量pcr标准曲线相关问题

z流沙z

原液浓度高，ct值小，这是正确的，稀释后ct值变大才符合

3 回答388 围观

问关于细胞污染

z流沙z

圆形的好像是细胞不像球菌污染那应该就是支原体污染，可以购买支原体去除剂

4 回答294 围观

问免疫组化看信号

z流沙z

蓝色的是细胞核，目的蛋白是棕褐色的

3 回答528 围观

问bv2小胶染色

loveliufudan

如果您在BV2细胞中使用对照染色法进行iNOS和Arg-1染色，并且两者都出现染色阳性的结果，这是符合预期的。iNOS和Arg-1是两个互补的酶，在不同类型的细胞中表达方式也不同。在BV2细胞中，iNOS主要参与一氧化氮（NO）的合成，而Arg-1则参与细胞色氨酸代谢和精氨酸代谢。因此，在炎症反应过程中，BV2细胞中同时表达iNOS和Arg-1也是可能的。总之，如果您的对照染色法显示BV2细胞中i

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问注射昆虫卵漏液不知道原因

loveliufudan

卵注射时漏出来有多种可能性，以下是可能导致卵注射漏出来的一些原因：针头选择不当：针头直径太大或者太小，都会影响注射的效果，太大的针头容易损伤卵细胞或者注入过多的液体，太小的针头则不容易将液体注入到卵内。注射液浓度不合适：如果注射液太浓稠，会导致注射液在注射时黏稠度过高，不容易进入卵内，从而导致漏出来。卵表面处理不当：在卵表面加入一定的粘附剂可以增加卵的黏性，从而提高注射液在卵内的粘附性。技术操作不

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问求助，小鼠脾脏淋巴细胞的培养

loveliufudan

小鼠脾脏淋巴细胞分离后，需要在含有一定浓度的细胞因子的培养基中培养，以刺激细胞增殖和活化。其中，IL-2是一种重要的细胞因子，它可以促进T淋巴细胞（包括调节性T细胞和效应T细胞）的增殖和存活。因此，你可以在你的培养基中加入适量的IL-2（例如10 ng/mL），并在37°C下5% CO2条件下培养24小时或更长时间。另外，你还可以考虑加入其他一些细胞因子，如IL-4、IL-7、IL-15等，以增强

5 回答907 围观

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