实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

全部

细胞

问我电转细胞时必须要加入一种试剂，试剂自身可以导电，导致细胞总被击穿。请问如果不得不加导电试剂，一般加多少？

huarenqiang5

使细胞悬浮液中应含有尽量少的导电离子。10⁹ ～ 10¹º转化子/μg DNA。

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问人体鼻咽癌细胞（C666-1)怎么样才能让它贴壁更好，消化时间大概在多少，才能让细胞不聚团

烧伤科常医生

建议使用一次性培养瓶进口的最好，可以让贴壁效果更好，再就选择培养基血清培养基能使细胞更好的贴壁。至于怎么让细胞不聚团：可以低密度传代，选择适当的离心转速和时间离心聚团细胞。

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问细胞培养时，细胞背景里的黑点是什么？黑胶虫还是啥？如何处理？

sswei

体外培养的动物细胞很容易受到培养环境因素的影响，例如营养成分的改变、氧的供给、毒素、细胞代谢产物的积累、pH、剪切力、细胞密度及微生物污染等。这些环境的改变都有可能诱发细胞的凋亡，从而产生很多分泌的凋亡小体。凋亡小体大多游离在培养基中，但也有一些会通过暴露的核酸彼此之间相互黏连，从而形成一个棕色的凋亡小体团块，没有细胞光泽。建议：细胞培养的过程中一定要控制细胞传代的时间，不能让细胞“长过”；不要

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问哪里可以做荧光探针PCR HP菌株分型

土井挞克树

有专门的pcr公司可以做，费用应该在几千元左右

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问0.1克土加1ml水静置去上清100微加到900微pbs里面混匀然后再从混匀的pbs里吸100微涂板最后长出来245

sswei

每克土含有2.4undefined104 个细菌。

3 回答323 围观

问咨询一下广大的网友，我接下来需要在秀丽隐杆线虫体内过表达自身的miRNA，如何选择载体？

dxyc42u

选择构建过表达质粒就可以了。。

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问蛋白质纯化洗脱中洗脱液的梯度如何操作

loveliufudan

“从0到400mM的递增NaCl溶液”的意思是用NaCl浓度从0mM开始，逐步增加至400mM的一系列NaCl溶液进行洗脱。这个操作通常是为了逐步改变柱子环境的离子强度，从而分级洗脱在离子交换柱上不同程度吸附的蛋白质。通常的方法是，首先准备一些NaCl溶液，如0mM、50mM、100mM、200mM、300mM、400mM等。这些溶液可以根据实际需要和实验要求准备。然后，你可以首先使用0mM的Na

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问求完整的DASH饮食评分表，以及计分原则？

loveliufudan

关于DASH饮食的评分表，不同的研究中可能会有所差异，因为评分可能会根据研究的特定目标或人群进行调整。但基本的原理是根据个体的食品类别和摄入量进行评分，与DASH饮食指南的建议相符者得分更高。下面是一个基本的DASH饮食评分示例（每日摄入）： 1. 全谷类：每日6-8份，每份对应1分。 2. 蔬菜：每日4-5份，每份对应1分。 3. 水果：每日4-5份，每份对应1分。 4. 低脂奶制品：每日2-3

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问DEAE Sepharose fast 离子交换柱上样前是否需要过0.45μm的膜

loveliufudan

DEAE Sepharose Fast Flow是一种阳离子交换色谱介质，常用于蛋白质纯化。其颗粒大小通常在90-165微米范围内，因此理论上，对样品进行0.45微米或0.22微米的过滤并不会影响到色谱柱的填充物。过滤样品的目的主要是为了去除可能阻塞柱的大颗粒物质，比如细胞碎片或未溶解的沉淀物。如果你的样品已经通过其他方法（例如离心或超速离心）去除了这些大颗粒物质，那么可能不需要再进行过滤。但是，

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问比浊法测定细菌生长曲线需要知道初始菌液浓度吗？

mistll8

比浊法测定的话是需要知道初始浓度的哦

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问蛋白质分离纯化过程中各种缓冲液如何配制

loveliufudan

这些缓冲液的配制主要涉及到以下化学物质：Tris，盐酸，NaCl，EDTA，NaH2PO4，PMSF和protease inhibitor cocktail。下面是每种缓冲液的具体配制方法： 1. 匀浆缓冲液：先在适当体积的去离子水中溶解适量的Tris和NaCl，再加入EDTA。之后使用盐酸或者氢氧化钠调整pH到8.0。所有物质应配成最终浓度为200 mM Tris-HCl，150 mM NaCl

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问MTT测OD是用多少nm波长检测？

行而上学不行

实验中波长的选择主要依赖于你要测的样品。样品在不同的波长下，对光的吸收值也不同，但都有一个吸收峰，一般选择吸收峰时的波长进行实验。比如同样是MTT法做细胞毒性实验，就有使用490nm和570nm两种波长选择，如果使用了DMSO作为试剂，在溶解后呈紫（红）色，在490nm有最大吸收值；而对于SDS和酸化异丙醇，则选用570nm（655nm作为参考波长）。

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问GEO数据库图解

skyye

无论何种形式的图，读图首先就是看图的题目，然后看横坐标和纵坐标，再看不同图标代表的不同分组，基本就能理解图所呈现的意思了

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问多重实时荧光PCR方法学建立，需要什么性能验证

阿繁体哥哥

灵敏度，准确度，线性范围，最低检测线

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问求助RTPCR

阿繁体哥哥

电压，灰尘，温度不准，试剂的问题都有可能

3 回答375 围观

问外泌体在水凝胶中的释放

dxy_mqg1dtg8

从你的描述中，我猜测你是在使用水凝胶来固定细胞，并收集水凝胶上的外泌体。在这种情况下，你需要注意一些细节，以确保测量结果的准确性：1. 在测量前，需要将所有水凝胶上的外泌体充分释放。为此，可以使用一定浓度的洗涤缓冲液来洗涤水凝胶，以收集所有的外泌体。通常来说，需要多次洗涤，并将每次洗涤所得的上清汇总，用于后续的测量。2. 测量时，需要将每个时间点所得的上清进行分别测量。如果你想计算总释放量，可以将

2 回答1486 围观

问带分离胶的采血管采集的全血在4度下可以放置多久，准备提取血清RNA用？

阿繁体哥哥

可以放置12小时，超过这个时间就开始溶血了

5 回答1263 围观

问统计方法的选择

emptyblue87

方差齐可考虑多因素方差分析，不齐则可考虑广义估计方程

4 回答403 围观

问危险因素分析文章的亮点

牧羊小童

关键还是看结果是否回到了前面提出的科学问题

4 回答381 围观

问细胞共培养

Eason老歌迷

关于培养基问题需要看下 A B 细胞平时里用的什么培养基了能统一最好统一吧不一样的话可以接种前换成一样的也行。做共培养，两种培养基最好一致，最差也要找个折中方案，或者控制培养时间，使不同的培养基不至于产生额外影响；另外，你想看A对B的影响，把B放在上室，收集起来很麻烦，面积也不够大；不知道你看到过共培养小室没有，再好的小室也不是全透明的，放在上室的细胞观察和照相都不如下室。理论上上下室细胞

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