实验问答

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科研学霸天团，48小时有问必答

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细胞

问羊水细胞培养检测染色体时，如何通过观察亮圆细胞的生长状态，判断细胞收获的时机？

秋秋欣欣

培养瓶中可以见有4～6个较大的细胞“克隆”；细胞“克隆”中存在宛如明珠的分裂细胞，有时互相连接，成双成对，能在一个视野中计数10～15个球形细胞；

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问NKT细胞的详细培养方法？

loveliufudan

NKT细胞培养中，常用的细胞因子包括IL-2（白介素-2）和IL-15（白介素-15），而L-7（Ligand 7）并不是常规使用的细胞因子之一。所以一般情况下，在NKT细胞培养中并不会添加L-7。关于每个细胞因子的添加量和培养周期的长度，会根据实验室中的具体研究需求和细胞株的特性而有所不同。通常情况下，IL-2和IL-15会在培养基中添加，并且其浓度会根据实验目的进行优化。常见的IL-2添加浓度

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问巢氏pcr，两次程序都一样，这种杂带比较多怎么修改程序

汤姆卜丽波

你可以适当延长退火时间，降低退火温度

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问细胞实验用耐药株细胞，动物实验可以不用耐药株用普通株吗（不涉及耐药性实验，本来准备做的，后来决定不做那个药的耐药考察了）

sswei

不同性质的菌珠细胞会对实验结果产生影响。

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问高效液相法测定红景天苷和绿原酸等物质的色谱条件是什么？如何确定的呀？

dxyc42u

红景天试在276和220 nm波长处分别有峰值吸收，以220 nm吸收强度最大，灵敏度最高，而且样品中其它基体物质干扰小。

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问求容易接收case report 的杂志，影响因子不限？

dxyc42u

Medicine 是发表个案报道最多的期刊。审稿速度快，大约1~3个月左右。

3 回答3856 围观

问L-谷氨酰胺在细胞培养中重要吗？它在溶液中稳定性怎样？

sswei

L-谷氨酰胺在细胞培养时是比较重要的。脱掉氨基后，L-谷氨酰胺可作为培养细胞的能量来源、参与蛋白质的合成和核酸代谢。L-谷氨酰胺在溶液中经过一段时间后会降解。L-谷氨酰胺的降解导致氨的形成，而氨对于一些细胞具有毒性。

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问为什么我的细胞原代培养总是失败？

sswei

1：防污染意识欠缺2：器材灭菌不彻底手术器械混用后，没有进行高温湿热灭菌（121℃/25min以上），因为单纯的紫外照射消毒压根不能排除污染源，另外，打开包装的离心管、EP管、枪头等，超过一周以上未及时重新灭菌，细胞实验最忌讳的就是怕麻烦和懒，一定要勤于清洗和灭菌实验器材。3：原代材料处理不当实验所用细胞原代培养的动物，进入紫外传递箱之前，没有进行75%乙醇浸泡消毒，而且获取相应的组织时，解剖手法

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问Nk细胞培养相关问题

sswei

坚持无菌操作，避免细胞污染和交叉感染。细胞密度要适宜，太低可能导致细胞凋亡，太高则可能造成细胞堆积、难以吸附。培养基的选择要根据实验需要进行，一般包括基础培养基、补充剂等。培养条件要符合细胞生长的需求，如温度、湿度、CO2浓度、培养器等。定期更换培养基，避免老化和积累有害物质。

4 回答536 围观

问怎么样才能提取小鼠细胞 dna

dxyc42u

操作步骤：（1）收集小鼠细胞，PBS 漂洗3次；（2）将细胞悬浮于500 ul的TNE缓冲液中；（3）加入6 ul20mg/ml蛋白酶K和50ul10%SDS，轻缓摇动；（4）37℃保存1-4小时；（5）加入等体积250ul饱和酚和氯仿，轻摇15-20分钟，1200rpm离心5分钟，用大口径吸管转移上清；（6）用2倍体积的乙醇（室温），轻摇至DNA出现；（7）12000rpm离心10 min，20

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问CUMS

dxyc42u

CUMS还可以用于氧化应激的研究

3 回答180 围观

问冰冻包埋"沉糖"困惑泪腺组织在经过48小时4℃-30%蔗糖中浸泡仍无法沉糖，

dxyc42u

可以尝试一下在梯度蔗糖溶液中浸泡

3 回答2799 围观

问从一个过表达的质粒上把过表达的那个片段用限制性核酸内切酶切下来，连接到另一个用同样限制性核酸内切酶切开的载体上为啥连接不上

汤姆卜丽波

有可能是一个平末端一个黏性末端，你可以先连一个T载体，再尝试连下一个载体

4 回答536 围观

问检测呼吸末一氧化氮的文章适合哪本杂志？

dxyc42u

《ANAESTHESIST》这个可以

3 回答324 围观

问我的主要研究方向是caveolin-1（小窝蛋白）相关信号通路，请问这方面国内有哪些影响因子比较高的期刊？

汤姆卜丽波

推荐gene and disease这个杂志不错

4 回答247 围观

问请问谁有BALB/C小鼠腋下或皮下接种肿瘤细胞，成瘤后的小鼠图片？

汤姆卜丽波

我觉得你最好在pubmed里download文献，里面有成瘤的对比图，可以参考，然后在ppt里标注一下参考出处就可以了

3 回答572 围观

问紫色杆菌CV026遇粗提信号分子怎么显色 ?

dxyc42u

首先将 2.5g/mL 的信息物质（C8-HSL）滴一滴在 LB 平板上涂布均匀，然后取新鲜菌液在平板上划线，30 度培养后可见菌株变紫色。

3 回答1161 围观

问请问动物组织有颜色bca怎么破

汤姆卜丽波

如果不能完全避免底色那你只能通过设置负空白组将初始颜色抵消掉

4 回答426 围观

问求助胆结石的中性粒细胞胞外网络nets怎么做啊

dxyc42u

1.NET测定缓冲液将500 ml RPMI 1640基础细胞培养基（未提供）与5 g牛血清白蛋白测定试剂和500 ul氯化钙（1M）测定试剂混合制备NET测定缓冲溶液。NET测定缓冲液不是用来杀菌的，也不需要在组织培养罩中制备或使用。在细胞刺激和添加核酸酶之前，将NET测定缓冲溶液预热至37℃，以确保快速激活和随后的核酸酶活性。储存未使用的NET分析缓冲液、无菌过滤器、等分试样，并储存在-20

3 回答606 围观

问透射电镜，help help

土井挞克树

镜下没有溶酶体，可能是裂解过度把细胞器破坏掉了，还是要摸索实验过程，避免破坏掉需要的细胞器

4 回答647 围观

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