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        要做已知蛋白的蛋白质组学需要怎么处理细胞?

        相关实验:实质等同性(蛋白质组学)实验

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        dxy_2sid6r54


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        5 个回答

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        此用户已注销

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        在保证蛋白提取效果的情况下,尽可能用简单的处理方法提取蛋白;


        高丰度蛋白是质谱检测的头号大敌,在实验中要尽可能的减少引入高丰度蛋白的可能;


        SDS等去污剂与后续质谱不兼容,提取蛋白时需要慎用,上质谱前必须去除;


        提取出蛋白后需要妥善保管和保存蛋白液,尽量避免反复冻融导致的蛋白降解;


        样本种类复杂,各类前处理方法需要灵活搭配使用。

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        粥辰辰辰辰

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        常见的处理方法也很多,包括加入裂解液直接冰上裂解、反复冻融法裂解、加入裂解液后超声处理、SDS高温煮沸提取等。

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        高山云初

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        一般来说我们会选择加入裂解液后超声处理来提取细胞蛋白,其实验步骤与动物组织类似。此类方法通常情况下,我们要求细胞量需要达到106的数量级。当然,有一些新的技术方法,需要的细胞量会非常少,比如,现阶段我们常提到的微量样本蛋白质组学,能对10-1000个细胞进行蛋白质组学实验;随着蛋白质组学技术的发展,甚至能对一个细胞进行蛋白质组学分析,比如单细胞蛋白质组学等。

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        huarenqiang5

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        1.动物组织蛋白抽提

        动物组织样本,首先对其进行充分的研磨,有条件的实验室也可以使用匀浆机,能够将其最大程度均质化。但是将组织进行研磨是不能让蛋白充分得到释放的,还需要用超声破碎仪将细胞全部破碎。这样细胞中的蛋白质可以充分的释放,进而提取到充足的全蛋白。


        2.植物组织蛋白抽提

        建议采用酚抽提法,可以去除多余杂质的干扰。研磨好植物样本之后,加入酚抽提液至离心管的1/2,常温下等待10分钟反应,再加入Tris平衡酚至离心管口,放入4℃冰箱中萃取30分钟。30分钟后,酚层与水层会进行分离,上层酚层就是我们萃取得到的蛋白质,吸取出来后使用有机试剂进行沉淀以达到去除酚的目的,得到纯化蛋白溶液。


        3.微生物蛋白抽提

        提取需要采用酚抽提法,可以去除多余的杂质。超声破碎之后,操作与植物的酚抽提法基本一致。加入Tris平衡酚,反应后,离心取上层。取样品粉末补充(预冷)抽提液至1ml混匀,再进行超声破碎。加入有机试剂洗去酚体系,沉淀蛋白。将沉淀的蛋白收集并且复溶离心取上清获得总蛋白溶液。

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        土井挞克树

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        细胞样本相对较容易处理,常见的处理方法也很多,包括加入裂解液直接冰上裂解、反复冻融法裂解、加入裂解液后超声处理、SDS高温煮沸提取等。

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