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        求助|研一新手小白做石蜡切片的免疫荧光步骤,请各位师哥师姐帮忙看看!!!

        相关实验:植物石蜡切片技术

        user-title

        阿丝

        请各位师哥师姐帮忙看看指点一下,非常感谢!!!

        小鼠肾组织的石蜡切片,需要做荧光双标。我现在定好了抗体:

        蛋白A(一抗:山羊多抗 二抗:荧光偶联驴抗山羊)

        蛋白B(一抗:兔多抗 二抗:荧光偶联驴抗兔)

        两种荧光颜色不重叠。我现在准备买抗荧光淬灭液,请问我是需要看文献查找目的抗原在不在胞内,再决定淬灭液带不带DAPI吗?如果带DAPI我还需要在孵育切片前做通透吗?两种一抗我可以同时孵育吗?因为两种抗体品牌不同,是否按照各自的终浓度在同一封闭液中(一定浓度驴血清)稀释?

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        3 个回答

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        1. 抗荧光淬灭液的选择:在选择抗荧光淬灭液时,了解您的目的抗原是否在细胞核内或胞外是很重要的。如果目的抗原在细胞核内,可以考虑选择带有DAPI的抗荧光淬灭液,以便进行细胞核染色。如果目的抗原在胞外,则可以选择不带DAPI的抗荧光淬灭液。

        2. DAPI染色和透明化处理:如果您选择使用带有DAPI的抗荧光淬灭液进行细胞核染色,通常不需要额外的透明化处理。DAPI染色可以直接在孵育切片前进行。

        3. 同时孵育两种一抗:可以同时孵育两种一抗,但需要确保两种一抗不会发生交叉反应。为了避免交叉反应,您可以选择使用不同的二抗荧光偶联(如驴抗山羊和驴抗兔),以便在荧光显像中区分两种一抗。

        4. 一抗的稀释:对于不同品牌的一抗,最好按照各自的推荐终浓度进行稀释。您可以在同一封闭液中使用不同一抗的适当稀释倍数,以确保每种一抗的最佳效果。

        user-title

        于小鱼鱼1998

        有帮助

        是的,需要先看目的蛋白在不在细胞内,再考虑淬灭,如果目的蛋白在细胞外,则需要淬灭,淬灭前先通透,保证淬灭效果

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        dapi需要孵育前做通透处理,然后再进行dapi

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