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        核蛋白提取时有浆蛋白污染怎么办

        相关实验:核蛋白提取实验

        user-title

        冰532I

        想问有什么方法使提取核蛋白时不受浆蛋白污染,之前提取的核蛋白使用β-actin做内参,在核蛋白里面显示有β-actin的条带。提取浆蛋白后也用PBS洗了两次再提取核蛋白,但是都不纯

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        2 个回答

        user-title

        sswei

        有帮助

        用 0.5 ml 预冷 PBS 重悬,10000 rpm,离心 3-5 分钟清洗沉淀可以减少胞浆蛋白污染

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        避免浆蛋白污染的方法:

        在收集细胞时,将细胞重悬于适当体积的浆蛋白提取试剂(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂)中,振荡混匀15 秒,使细胞完全悬浮并分散开。如果细胞沉淀没有完全悬浮并分散开,可以适当延长振荡混匀时间。冰浴30 min。高速振荡混匀5 秒,4℃13000g 离心10 min。吸取上清至一预冷的离心管中,即为细胞浆蛋白。吸尽上清(上清尽量去净,避免浆蛋白污染),加入适当体积的核蛋白提取试剂(使用前数分钟内加入蛋白酶抑制剂),高速振荡混匀15 秒,使沉淀完全悬浮并分散开。冰浴30min,每隔5min剧烈振荡混匀10~20s, 4℃13000g离心10 min。吸取上清至一预冷的离心管中,即为细胞核蛋白。

        user-title

        冰532Iuser-title

        你好,提取核蛋白的时候涡旋振荡那个沉淀都不能完全分开,你是用什么办法完全分开的。我也是尝试延长涡旋时间了也不行。

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