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        请问哪位好心人有大鼠睾丸冰冻切片的protocol吗?

        相关实验:冰冻切片免疫荧光

        user-title

        Makoko

        我做出来切出来都是碎碎的,感觉是自己的protocol有问题,我也没有去白膜,还是看有人说要去白膜才知道🥹

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        2 个回答

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        最好是去掉白膜,然后延长固定时间,一般就不容易碎。

        user-title

        Makokouser-title

        请问去白膜是固定好之后再去嘛,感觉固定前去的话容易曲细精管变成一滩 •̩̩̩́ ˑ̫ •̩̩̩̀

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        固定:将组织置于4%多聚甲醛固定液中,4℃摇床过夜。

        漂洗:将固定后的标本用1X;PBS漂洗三次,每次15分钟。

        脱水:将组织置于30%蔗糖溶液中,4℃摇床过夜。第二天观察是否脱水完全,判断的标准是,当管竖直时,组织是否沉到蔗糖溶液的底部,若组织已完全沉降到蔗糖溶液的底部,平放或震荡后仍能沉降,则可判断组织已脱水完全。

        包埋:将组织倒入培养皿中,做好标记。之后将组织置于包埋盒中,用滤纸吸干组织周围多余的蔗糖溶液,滴加OCT(optima cutting temperature compound)到包埋盒中,用移液枪头小心的将组织周围的O.C.T混匀,切忌起气泡,静止10分钟,以防切片时脱片。重新取一个包埋盒,将组织移入到包埋盒中,倒入OCT,再次用移液枪头将组织与O.C.T混匀,将组织按切片需要方向摆放于包埋盒的底部,迅速置于干冰与酒精的混合物中。在包埋盒上做好标记,用保鲜膜和锡纸包好后放入-80℃冰箱贮藏待切

        user-title

        Makokouser-title

        请问固定是用bouin's还是PFA好呢?还有请问大鼠睾丸需要打孔嘛,我的protocol是用bouin's固定的,第二天用的蔗糖梯度脱水(10%6h+20%6h+30%过夜),这样是不是不如30%蔗糖脱水完全呀

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