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        冰冻切片如何去除红细胞影响?

        相关实验:冰冻切片免疫荧光

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        飞毛小鼠

        求助大佬们,我切的组织是淋巴结,先灌注再取的,共聚焦显微镜下淋巴结上有很多特别亮的点怀疑是红细胞,发红光,在绿光里也呈现特别亮的黄色。

        我用PBST把片子洗得特别久,也会有这种红光,而且形态各异,这样就完全和我标记了红色的抗体分不清了。

        请问大佬们,你们染淋巴结会遇到这个问题吗,怎么解决呢?不甚感激!

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        4 个回答

        user-title

        balalaLy

        有帮助

        有可能不是红细胞,就是单纯的自体荧光。有没有做隐性对照对比一下。

        user-title

        飞毛小鼠user-title

        有做的。阴性对照也有这种红光

        user-title

        土井挞克树

        有帮助

        可以在做切片之前把红细胞裂解掉

        user-title

        飞毛小鼠user-title

        请问是直接用裂解液洗10分钟吗

        user-title

        Dr_劉医生

        有帮助

        有红细胞说明组织有凝血,甲醛固定没完全;建议灌注时间要过长,固定液要多,一般是1:9比例保存组织

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        首先是染色时间是否准确?然后看玻片之间有无重叠?在染色过程中,要严格按操作步骤进行。再者缓冲液的配制、切片的漂洗、试剂的纯度等都有关系。

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