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        小鼠原代肝细胞提取求助

        相关实验:原代外植

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        dxy_gu2txl39

        灌流液用0.5mMEGTA+D-hanks液配置

        消化液用100cdu/ml四型胶原酶+基础培养基配置

        每次灌流速度为5ml/min

        灌流消化液结束后,取出的肝细胞基本上都死了,不知道到底哪出了问题,有没有小伙伴帮忙解答一下!!!!求求求求

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        4 个回答

        user-title

        huarenqiang5

        有帮助

        考虑以下几点原因:1.培养液配制的浓度不够,导致培养液失效。2.接种浓度不够。3。胰蛋白酶的活性弱。

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        土井挞克树

        有帮助

        把流速降低一下,流速过高会打碎细胞

        user-title

        loveliufudan

        有帮助

        可能有几个原因导致肝细胞死亡:

        1. 消化液浓度过高:四型胶原酶的浓度可能过高,导致消化液对肝细胞产生毒性作用。你可以尝试降低四型胶原酶的浓度,以减少细胞损伤。

        2. 灌流速度过快:灌流速度过快可能导致肝细胞无法适应环境的变化,造成细胞应激和死亡。你可以尝试降低灌流速度,给予细胞更多适应和恢复的时间。

        3. 灌流液pH值不适宜:灌流液的pH值可能对细胞生存起着重要作用。确保灌流液的pH值在适宜的范围内(一般为7.2-7.4)可能有助于减少细胞损伤。

        user-title

        sswei

        有帮助

        由于刚刚经过胶原酶消化的肝细胞极其脆弱,过于用力会导致肝细胞破碎,导敢提取失败。

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